Name: تحليل الكمي الإنبثاث السرطان باستخدام الأجنة النموذجي الطيور (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-05-30T22:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 40 s
Description: اكتشف تقييم القدرة الإنبثاثية للخلايا السرطانية باستخدام نموذج الغشاء الكوريوني السائل للجنين. يوفر هذا النموذج طريقة سريعة وكمية لدراسة انتشار الأورام في الأبحاث السرطانية.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

نريد أن يعترف تايسون فودز لتوفير بسخاء البويضات المخصبة. وكان ارنولد شانا مفيدة أثناء تصوير هذا البروتوكول. وأيد Trenis بالمر من قبل المعاهد الوطنية للصحة تحت L. روث الجائزة الوطنية كيرشتاين دائرة البحوث (F31 المعهد الوطني للسرطان). وأيد هذا العمل جزئيا من خلال المنح CCSRI # 700537 لرابطة الدفاع اليهودية والمعاهد الوطنية للصحة / NCI منح # CA120711 - 01A1 - 01A1 وCA120711 إلى الألف إلى الياء.

<ol><li>Ghiso, A. guirre, Kovalski, J. A., K,, Ossowski, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumor+dormancy+induced+by+downregulation+of+urokinase+receptor+in+human+carcinoma+involves+integrin+and+MAPK+signaling%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Tumor dormancy induced by downregulation of urokinase receptor in human carcinoma involves integrin and MAPK signaling.</a> J Cell Biol. 147, 89-104 (1999).</li>
<li>Chambers, A. F., Shafir, R., Ling, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+model+system+for+studying+metastasis+using+the+embryonic+chick%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+research%22%5BJournal%5D)">A model system for studying metastasis using the embryonic chick.</a> Cancer research. 42, 4018-4025 (1982).</li>
<li>Chambers, A. F., Wilson, S. M., Tuck, A. B., Denhardt, G. H., Cairncross, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+metastatic+properties+of+a+variety+of+mouse%2C+rat%2C+and+human+cells+in+assays+in+nude+mice+and+chick+embryos%5BTitle%5D)+AND+%22In+Vivo%22%5BJournal%5D)">Comparison of metastatic properties of a variety of mouse, rat, and human cells in assays in nude mice and chick embryos.</a> In Vivo. 4, 215-219 (1990).</li>
<li>Deryugina, E. I., Zijlstra, A., Partridge, J. J., Kupriyanova, T. A., Madsen, M. A., Papagiannakopoulos, T., Quigley, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Unexpected+effect+of+matrix+metalloproteinase+down-regulation+on+vascular+intravasation+and+metastasis+of+human+fibrosarcoma+cells+selected+in+vivo+for+high+rates+of+dissemination%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Unexpected effect of matrix metalloproteinase down-regulation on vascular intravasation and metastasis of human fibrosarcoma cells selected in vivo for high rates of dissemination.</a> Cancer Res. 65, 10959-10969 (2005).</li>
<li>Hahn-Dantona, E., Ramos-DeSimone, N., Sipley, J., Nagase, H., French, D. L., Quigley, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activation+of+proMMP-9+by+a+plasmin%2FMMP-3+cascade+in+a+tumor+cell+model.+Regulation+by+tissue+inhibitors+of+metalloproteinases%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+N+Y+Acad+Sci%22%5BJournal%5D)">Activation of proMMP-9 by a plasmin/MMP-3 cascade in a tumor cell model. Regulation by tissue inhibitors of metalloproteinases.</a> Ann N Y Acad Sci. 878, 372-387 (1999).</li>
<li>Kim, J., Yu, W., Kovalski, K., Ossowski, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Requirement+for+specific+proteases+in+cancer+cell+intravasation+as+revealed+by+a+novel+semiquantitative+PCR-based+assay%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Requirement for specific proteases in cancer cell intravasation as revealed by a novel semiquantitative PCR-based assay.</a> Cell. 94, 353-362 (1998).</li>
<li>Leong, H. S., Steinmetz, N. F., Ablack, A., Destito, G., Zijlstra, A., Stuhlmann, H., Manchester, M., Lewis, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intravital+imaging+of+embryonic+and+tumor+neovasculature+using+viral+nanoparticles%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Intravital imaging of embryonic and tumor neovasculature using viral nanoparticles.</a> Nat Protoc. 5, 1406-1417 (2010).</li>
<li>Lewis, J. D., Destito, G., Zijlstra, A., Gonzalez, M. J., Quigley, J. P., Manchester, M., Stuhlmann, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Viral+nanoparticles+as+tools+for+intravital+vascular+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">Viral nanoparticles as tools for intravital vascular imaging.</a> Nat Med. 12, 354-360 (2006).</li>
<li>Ossowski, L., Reich, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Changes+in+malignant+phenotype+of+a+human+carcinoma+conditioned+by+growth+environment%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Changes in malignant phenotype of a human carcinoma conditioned by growth environment.</a> Cell. 33, 323-333 (1983).</li>
<li>Schmittgen, T. D., Livak, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analyzing+real-time+PCR+data+by+the+comparative+C%28T%29+method%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Analyzing real-time PCR data by the comparative C(T) method.</a> Nat Protoc. 3, 1101-1108 (2008).</li>
<li>Testa, J. E., Brooks, P. C., Lin, J. M., Quigley, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Eukaryotic+expression+cloning+with+an+antimetastatic+monoclonal+antibody+identifies+a+tetraspanin+%28PETA-3%2FCD151%29+as+an+effector+of+human+tumor+cell+migration+and+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Eukaryotic expression cloning with an antimetastatic monoclonal antibody identifies a tetraspanin (PETA-3/CD151) as an effector of human tumor cell migration and metastasis.</a> Cancer Res. 59, 3812-3820 (1999).</li>
<li>Zijlstra, A., Lewis, J., Degryse, B., Stuhlmann, H., Quigley, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Inhibition+of+Tumor+Cell+Intravasation+and+Subsequent+Metastasis+via+Regulation+of+In+Vivo+Tumor+Cell+Motility+by+the+Tetraspanin+CD151%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">The Inhibition of Tumor Cell Intravasation and Subsequent Metastasis via Regulation of In Vivo Tumor Cell Motility by the Tetraspanin CD151.</a> Cancer Cell. 13, 221-234 (2008).</li>
<li>Zijlstra, A., Mellor, R., Panzarella, G., Aimes, R. T., Hooper, J. D., Marchenko, N. D., Quigley, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+quantitative+analysis+of+rate-limiting+steps+in+the+metastatic+cascade+using+human-specific+real-time+polymerase+chain+reaction%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">A quantitative analysis of rate-limiting steps in the metastatic cascade using human-specific real-time polymerase chain reaction.</a> Cancer Res. 62, 7083-7092 (2002).</li>
</ol>

الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

وقد استخدم CAM الفرخ على مدى عقود في نظام نموذجي لدراسة الجوانب المختلفة لتطور السرطان والبيولوجيا النقيلي. وقد تم تنفيذ مبدأ تقييم القدرات المنتشر في هذا النموذج من قبل مجموعة متنوعة من الفئات بما في ذلك تحليل السكون (Ghiso أغيري وآخرون ، 1999 ؛. Ossowski والرايخ ، 1983) ، إعادة تشكيل الأنسجة (Deryugina وآخرون ، 2005 ؛ هان - Dantona . وآخرون ، 1999) ، والانبثاث (Zijlstra وآخرون ، 2008 ؛. Zijlstra وآخرون ، 2002). أنها لا تزال نموذجا جذا...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><th> اسم كاشف </th><th> شركة </th><th> فهرس العدد </th><th> تعليقات (اختياري) </th></tr><tr><td> 1X Dulbecco في التعديل النسر متوسطة (DMEM) </td><td> Invitrogen </td><td> 11995073 </td><td></td></tr><tr><td> Dulbecco والفوسفات مخزنة المالحة (D - PBS) (1X) والسائلة </td><td> Invitrogen </td><td> 14190250 </td><td> الرقم الهيدروجيني 7،4 </td></tr><tr><td> التربسين ، 0.05 ٪ (1X) مع 4NA EDTA والسائلة </td><td> Invitrogen </td><td> 25300054 </td><td></td></tr><tr><td> رياضي هاتشر </td><td> التوت هيل </td><td> 1550HA </td><td rowspan="2"> هذه هي بعض من حاضنات المتاحة بسهولة أكثر. ومع ذلك ، سوف تظهر معدات الفيديو المختلفة. </td></tr><tr><td> رياضي الحاضنة </td><td> التوت هيل </td><td> 1502EA </td><td></td></tr><tr><td> DREMEL أداة دوارة </td><td> DREMEL </td><td></td><td></td></tr><tr><td> عجلات قطع DREMEL لا. 36 </td><td> DREMEL </td><td> 409 </td><td></td></tr><tr><td> محمول الماصة المعونة </td><td> الصياد </td><td> 1368115E </td><td></td></tr><tr><td> يميل القطن القضبان الرفيعة </td><td> الصياد </td><td> 23-400-001) </td><td></td></tr><tr><td> بيض </td><td> مختلف </td><td></td><td> ويمكن استخدام بائع عديدة ومختلفة. يجب أن يكون البيض حوالي 35-55 غرام. والدجاجات التي تبيض لهم يجب أن تكون بين 36 و 55 أسبوعا من العمر. </td></tr><tr><td> عدادة الكريات </td><td> Hausser العلمية وVWR </td><td> 15170-090 </td><td></td></tr><tr><td> الألياف البصرية المجهر منار </td><td> Amscope </td><td> HL250 - AY </td><td> 150W </td></tr><tr><td> إبرة قياس 25 </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> Sybr الاخضر المقتطف - N - PCR الأمبير الأنسجة كيت </td><td> سيغما الدريخ </td><td> XNATRG </td><td></td></tr></tbody></table>

تحليل الكمي الإنبثاث السرطان باستخدام الأجنة النموذجي الطيور

Quantitative Analysis of Cancer Metastasis using an Avian Embryo Model

خلال نشر الخلايا السرطانية الانبثاث من الورم الرئيسي ، إلى غزو الأنسجة المحيطة بها ، والانتشار إلى أعضاء بعيدة. الانبثاث هي عملية معقدة يمكن أن تنطوي على العديد من أنواع الأنسجة ، وفترات زمنية متنوعة ، وغالبا ما تحدث في أعماق الأجهزة ، مما يجعل من الصعب تحقيق وكميا. بالإضافة إلى ذلك ، تأثر فعالية عملية المتنقل بخطوات متعددة في تتالي النقيلي مما يجعل من الصعب تقييم مساهمة من جانب واحد للسلوك الخلية السرطانية. نتيجة لذلك ، كثيرا ما يتم تنفيذ المقايسات الانبثاث في حيوانات التجارب لتوفير سياق واقعي بالضرورة للدراسة الانبثاث. لسوء الحظ ، فإن تعقيد هذه النماذج التي لها علم وظائف الأعضاء المعقدة. الجنين الفرخ هو نموذج فريد في الجسم الحي أن يتغلب على الكثير من القيود على دراسة ورم خبيث ، ويرجع ذلك إلى سهولة الحصول على غشاء مشيمائي (CAM) ، وأوعية دموية جيدة خارج الأنسجة الجنينية تقع تحت قشر البيض الذي يتم تقبلا لxenografting الخلايا السرطانية (الشكل 1). وعلاوة على ذلك ، لأن الجنين الفرخ هو العوز المناعي بشكل طبيعي ، وتدعم CAM engraftment بسهولة من الأنسجة الطبيعية على حد سواء والورم. الأهم من ذلك ، CAM الطيور يدعم بنجاح خصائص الخلايا السرطانية أكثر بما في ذلك النمو ، والغزو ، الأوعية الدموية ، وإعادة تشكيل المكروية. هذا يجعل نموذج مفيد بشكل استثنائي من أجل التحقيق في الممرات التي تؤدي إلى ورم خبيث من السرطان والتنبؤ استجابة للعلاجات السرطان النقيلي جديدة محتملة. الكشف عن الخلايا التي تنشرها أنواع محددة PCR ألو يجعل من الممكن إجراء تقييم كمي لورم خبيث في الأجهزة التي استعمرها قليلة مثل 25 الخلايا. باستخدام الإنسان سرطانة بشرانية خط الخلية (HEp3) نستخدم هذا النموذج لتحليل الانبثاث عفوية الخلايا السرطانية إلى أعضاء بعيدة ، بما فيها الكبد والرئة الفرخ. علاوة على ذلك ، باستخدام بروتوكول ألو - PCR نظهر حساسية واستنساخ للمقايسة كأداة لتحليل وquantitate intravasation واعتقال والتسرب ، والاستعمار بوصفها عناصر فردية من ورم خبيث.

باستخدام كمية PCR ، علينا أن نظهر كيف يمكن استخدام نموذج راسخة CAM فرخ لتحليل كمي لورم خبيث من الخلايا السرطانية البشرية إلى الأجهزة البعيدة.

خلال عملية الانتقال، تنتشر الخلايا السرطانية من الورم الأولي، وتغزو الأنسجة المحيطة، ثم تنتقل إلى أعضاء بعيدة. ويُعد الانتقال عملية معقدة...

الهدف العام من هذا الإجراء هو التقييم الكمي للقدرة الانتقالية للخلايا السرطانية باستخدام الغشاء الكوريائي المدمج أو CAM كنموذج للطعم الغريب. يتم تحقيق ذلك أولاً عن طريق تحضين البيض المخصب حتى ينضج الغشاء الكوريائي المدمج. وتتمثل الخطوة الثانية من الإجراء في حقن الخلايا الورمية وريدياً أو زراعتها موضعياً كطعم غريب في الغشاء الكوريائي المدمج.بعد فاصل زمني محدد تجريبياً، يتم جمع الأنسجة لتحليلها، ثم يتم قياس كمية النقائل باستخدام تقنية PCR النوعية للبشر لتسلسل الأليل البشري، وتُحلل النتائج. اسمي ترينت بالمر، وأنا طالب دراسات عليا في مختبر الدكتور أندريه زيلسترا.سأقوم بشرح نموذج الطعم الغريب (xenograft) ونموذج النقائل التلقائية، بينما سيقوم مشرفي، الدكتور Zilstra، بشرح الحقن الوريدي ونموذج النقائل التجريبي. وتتمثل الميزة الرئيسية لهذه التقنية مقارنة بالنماذج الحالية في السرعة والسهولة التي يمكن من خلالها للباحث إجراء دراسة كمية لنقائل الخلايا الورمية البشرية، حيث يمكن للباحثين تجهيز ما يقرب من 120 حيواناً وإتمام البروتوكول من البداية إلى النهاية في غضون أسبوعين.نظراً لإمكانية الوصول إلى جنين الدجاج وسهولة التعامل معه، يمكن توسيع هذا النظام بسهولة ليشمل تطبيقات أخرى في البيضة (X ovo). وقد حققنا ذلك في السنوات الماضية، وهو موضوع سلاسل أخرى في JoVE. يتم تحضين بيض الدجاج المخصب الطازج في حاضنة دوارة أربع مرات في الساعة لمدة 10 أيام.في اليوم العاشر، ضع البيض على جانبه فوق حامل البيض وسلط مصدر ضوء ساطع ومباشر داخل قشرة البيضة عند الطرف غير المدبب حيث تقع الغرفة الهوائية. حدد الآن نقطة تفرع الوريد الرئيسي؛ ويمكن التعرف عليها بسهولة أكبر عن طريق تدوير البيضة في نطاق 20 درجة حول محورها الطولي.لتصور النقطة التي ينفصل عندها الوعاء عن القشرة، ارسم مربعاً بطول ضلع واحد سنتيمتر على بُعد سنتيمتر واحد من نقطة تفرع الوريد القلبي. ثم نظف المنطقة المحيطة بالمربع باستخدام مسحة مغموسة في اليود. وباستخدام أداة دريميل (dremel) مزودة بحجر جلخ من كربيد السيليكون، احفر أولاً ثقباً عبر الطرف غير المدبب للبيضة وصولاً إلى الكيس الهوائي، ثم احفر ثقباً داخل المربع مع التوقف قبل الوصول إلى غشاء قشرة البيضة.الآن، استخدم بعناية إبرة عيار 25 ذات حافة مسننة دقيقة في طرفها لسحب غشاء قشرة البيضة؛ وعند تنفيذ ذلك بشكل صحيح، لن يتمزق الـ cam الموجود بالأسفل، مما يؤدي إلى فصل الـ cam عن الغشاء الذي تحته. استخدم مساعد ماصة أوتوماتيكيًا مزودًا بقطعة من أنابيب tigon بقطر ربع بوصة.قم بتطبيق شفط خفيف على ثقب الكيس الهوائي وتحقق من وجود جيب هوائي تحت الثقب في المربع، مما يشير إلى نجاح العملية. إذا تعرضت الكامة للتلف أثناء تمزيق غشاء قشرة البيضة، فلن تسقط الكامة بشكل واضح. عندما يتم شفط الكيس الهوائي عند تدوير البيضة، فإن الهواء المرئي أسفل القشرة مباشرة هو الذي يتم سحبه إلى داخل وتحت الكامة التالفة.لا يمكن استخدام هذه البيضات بعد إسقاط الغرفة الهوائية (cam). قم بتغطية كلا الثقبين بقطعة من شريط لاصق مختبري وأعد البيضات إلى حاضنة ثابتة. الآن أصبحت البيضات جاهزة لعملية الزرع الغريب (xenograft).ابدأ بتحضير الخلايا الورمية لعملية الزرع الغريب. أولاً، افصل الخلايا عن أطباق الزرع باستخدام trypsin EDTA. وأتمِ تحضير الخلايا بقياس كثافتها باستخدام مقياس كرات الدم (hemo cytometer)، ثم أعد تعليقها في PBS بتركيز يتراوح من 10 إلى 40 مليون خلية لكل milliliter.الآن، بعد تعقيم غطاء الحماية وأداة الدريمل باستخدام الإيثانول، أخرج البيض من الحاضنة. افتح نافذة في الجزء العلوي من قشرة البيضة، وباستخدام مسحة قطنية، قم بوخز الغشاء الجنيني خمس مرات؛ حيث يجب أن يظهر القليل من الدم على القطنة فوق المنطقة المتضررة. قم فوراً بحقن 25 microliters من معلق الخلايا، بحيث يتراوح عدد الخلايا بين نصف مليون ومليون خلية.الآن، قم بإغلاق النافذة باستخدام شريط لاصق مختبري واترك الخلايا تستقر لمدة تتراوح من 10 إلى 15 دقيقة. وبعد مرور 15 دقيقة، أعد البيض إلى الحاضنة الثابتة حيث تُترك الأورام لتنمو لمدة خمسة إلى ثمانية أيام. وباستخدام نفس طريقة التحضين الموضحة في القسم الثاني، اجمع البيض الذي يبلغ عمره 12 يوماً.ضع بيضة أمام مصدر الضوء لتحديد موقع الوريد السري والوريد المجهزي ووضع علامة فوق الوريد مباشرة. ارسم مربعاً بأبعاد 1 سنتيمتر في 0.5 سنتيمتر وقم بتنظيف المنطقة باستخدام مسحة مغموسة في اليود. الآن، باستخدام مثقاب يدوي مزود بريشة ثقب، اصنع نافذة صغيرة في قشرة البيضة عند المستطيل المحدد.قم بإزالة نافذة قشرة البيضة بعناية للكشف عن الغشاء الموجود تحتها. أضف قطرة من الزيت المعدني إلى الغشاء المكشوف لجعله شفافاً. استخرج البيض من الحاضنة وباستخدام حقنة أنسولين مقاس 30 gauge.احقن 100 µL من معلق الخلايا في الوريد auic لكل جنين. ثم ضع قطعة من الشريط اللاصق المختبري فوق الأغشية المكشوفة وأعد البيض إلى حاضنة ثابتة خلال فترة تتراوح من يوم واحد إلى سبعة أيام. يتم بعد ذلك استئصال الرئة أو الـ lower cam للكشف عن الخلايا الورمية كما هو موضح في القسم التالي.من الضروري تنفيذ هذه الخطوة من الإجراء في منطقة مخصصة للتشريح وبأقل قدر ممكن من احتمالية التلامس مع DNA. ولمنع التلوث الخلطي للعينات، استخدم ثلاث مجموعات منفصلة من الأدوات لقطع البيضة، وإزالة الورم الأولي، وإزالة الأعضاء الداخلية قبل البدء وبين عمليات التشريح. اغسل كل مجموعة من الأدوات مرة واحدة بالمبيّض، ومرة واحدة بـ 70% ethanol ومرتين بالماء المقطر المزدوج.تُخرج البيضات من الحاضنة الثابتة وتوضع على الثلج لمدة 15 دقيقة. ولتخدير الحيوانات وقتلها رحيمًا، تُفتح النوافذ بحيث تصبح الأورام مرئية. وقد يكون من الضروري توسيع النوافذ للكشف عن الأورام بشكل كامل.الآن، قم بقص الأورام الأولية من الجنين. وباستخدام مجموعة أدوات نظيفة، قم بوزن الأورام ومعالجتها للفحص النسيجي. بعد ذلك، انتقل إلى عملية حصاد الأعضاء.ابدأ بإخراج الجنين من قشرة البيضة. وللقيام بذلك، اقطع القشرة شعاعياً إلى نصفين متساويين، ثم اسكب جنين الدجاج من الفتحة.تقوم Shell أيضاً بجمع قطعتين من الغشاء القشري (cam) من كل جانب من قشرة البيضة باستخدام أداة تثقيب ووضعهما في أنبوب eend. يتم نقل الصوص إلى وعاء شمعي بحيث يكون جانب الصدر للأعلى. وباستخدام مجموعة نظيفة من أدوات التشريح، يتم فتح الجنين عن طريق القص عبر البطن وعظمة القص وفتح التجويف البطني.أولاً، يتم جمع قطعة من الكبد من الفص الأيمن أو الأيسر. والآن يمكن سحب الأعضاء بعناية مع قطع الأحشاء التي تربط بينها. اختر إحدى الرئتين وقم بالقص حول جوانبها الأربعة لتحريرها من القفص الصدري.لضمان الاتساق، اجمع الرئة نفسها من كل حيوان. في حال عدم معالجة أي من الأعضاء على الفور، تُحفظ عند -20 °C.بعد إزالة الطعم الخارجي لورم Hep three، تم إجراء تحليل نسيجي. هذه صبغة tri RME لورم Hep three. يظهر المكون السدوِي للورم بوضوح بين فصوص الورم المتميزة.تظهر هنا خلايا hep three المحقونة وريدياً والتي تعبر عن GFP باستخدام المجهر الفلوري. بعد يوم واحد من الحقن الوريدي، لا تظهر سوى خلايا ورمية فردية متفرقة، أما بعد ثلاثة أيام من الحقن، فمن الواضح أن عدد الخلايا في تزايد وأن مستعمرات صغيرة من الخلايا النقيلية بدأت في التشكل هنا. وقد تم قياس مستوى النقائل على مدار سبعة أيام بعد الزرع باستخدام تقنية real-time PCR لتسلسل A LU البشري.إن التقنية التي استعرضناها هنا اليوم هي نموذج عالي القيمة وكمي للغاية. وبمجرد إتقانها، يمكن للباحث التجريبي تجهيز ما يقرب من 30 حيواناً في الساعة، وبالإضافة إلى ذلك، يمكن تحليل النقائل كمياً باستخدام نموذج الجنين الطيري بعد اكتمال نموه خلال فترة أسبوعين. لقد أتاحت هذه التقنية للباحثين في مجال بيولوجيا السرطان تحليل النقائل كمياً باستخدام نموذج نقص مناعة طبيعي.

quantitative-analysis-of-cancer-metastasis-using-an-avian-embryo-model

Research

JoVE Journal

Medicine

الطب

يصف هذا الفيديو طريقة حقن مجهرية لتوصيل خلايا سرطان الثدي إلى الفضاء المحيط الزجاجي لأجنة الزرد المعدلة وراثيا. بعد الحضانة ، نتخيل الجنين تحت المجهر الفلوري لمراقبة غزو الخلايا السرطانية وانتشارها ورم خبيث.

zPDX-تحليل الغزو: التحقيق في السلوك الغازي للخلايا السرطانية النقيلية في الطعوم الغريبة لجنين أسماك الزرد

في هذا الفيديو ، نصف زرع الخلايا السرطانية على غشاء المشيمة للدجاج لتوليد نموذج في البيضا. نجح النموذج في تطعيم خلايا سرطان المبيض لدراسة تطور سرطان أمراض النساء.

نمذجة السرطان القائمة على غشاء المشيمة الدجاج: نموذج داخل البيض لدراسة تكوين أورام الخلايا السرطانية والورم الخبيث

يوضح هذا الفيديو إجراء حقن الخلايا السرطانية عن طريق الوريد في الأوعية الدموية لغشاء المشيمة للدجاج لتوليد نموذج ورم خبيث لسرطان الطب التكميلي. تشكل الخلايا المحقونة في النهاية مستعمرات خلايا سرطانية مفردة متناثرة ، مما يسمح بدراسة غزو السرطان ورم خبيث.

الحقن الوريدي للخلايا السرطانية في الأوعية الدموية الغشائية المشيمية للدجاج: إجراء لإنشاء نموذج سرطان الغشاء المشيمي لدراسة غزو السرطان والورم الخبيث

هنا ، يتم استخدام المراقبة في الوقت الفعلي لعملية التمثيل الغذائي للخلايا السرطانية ، جنبا إلى جنب مع نموذج الغشاء المشيمي آلانتوي لجنين الدجاج في الجسم الحي (CAM) للورم الخبيث ، لتقييم الأهداف / العوامل الجديدة المضادة للسرطان لقدرتها على توعية الخلايا السرطانية بالعلاج الكيميائي الضار بالحمض النووي.

تقييم فعالية سرطان المخدرات توعية<em&gt; في المختبر</em&gt; و<em&gt; في فيفو</em

هنا، نحن تصف نماذج الزرد طعم أجنبي باستخدام اثنين من مواقع الحقن المختلفة، أي الفضاء المحيط بالمح والقناة كوفييه، للتحقيق في السلوك العدواني وتقييم دخول الوعاء والتسرب إمكانات خلايا سرطان الثدي البشرية، على التوالي.

السلوك الغازية من خلايا سرطان الثدي البشرية في الجنينية الزرد

سرطان الخلايا الكلوية النقيلي ة الخلايا هو مرض دون نموذج الحيوان شاملة للتحقيق الشامل قبل السريرية. يوضح هذا البروتوكول نموذجين جديدين للحيوانات لهذا المرض: نموذج الماوس المزروع تقويمًا للموضع ونموذج غشاء الدجاج chorioallantoic ، وكلاهما يوضح انبثاث الرئة يشبه الحالات السريرية.

مقارنة النقيلي واضحة خلية الخلايا الكلوية نموذج سرطان الخلايا المنشأة في الكلى الماوس وعلى غشاء Chorioallantoic الدجاج

نقدم نموذج غشاء chorioallantoic الدجاج كبديل، قابل للزرع، في نموذج الجسم الحي لتطعيم خطوط خلايا سرطان النساء والمسالك البولية والأورام المشتقة من المريض.

استخدام غشاء Chorioallantoic الدجاج في نموذج Vivo لدراسة أمراض النساء وسرطان المسالك البولية

النهج الموصوف يجمع بين اختبارات الانبثاث الوريد الذيل التجريبية مع في الجسم الحية التصوير الحيواني للسماح الرصد في الوقت الحقيقي لتكوين ورم خبيث سرطان الثدي والنمو بالاضافه إلى التحديد الكمي للعدد الانبثاث وحجم في الرئتين.

الجمع بين استخدام الذيل الوريد الانبثاث الاختبارات والوقت الحقيقي في التصوير فيفو لقياس سرطان الثدي الاستعمار المنتشر والعبء في الرئتين

غالبا ما يستخدم الحقن الوريدي للخلايا السرطانية في أبحاث الانبثاث ، ولكن عبء الورم النقيلي قد يكون من الصعب تحليله. هنا، ونحن نظهر نموذج حقن ذيل الوريد من الانبثاث وتشمل نهجا جديدا لتحليل عبء ورم الرئة النقيلي الناتجة.

التحليل المرضي لنقائل الرئة بعد الحقن الجانبي الوريد الذيل من الخلايا السرطانية

هذه طريقة فعالة لفحص المكثفات أو محركات الانبثاث السرطاني. يتم حقن الخلايا ، التي يتم تحويلها باستخدام مكتبة التعبير ، في الأوعية الدموية للغشاء المشيمي للدجاج لتشكيل مستعمرات منتشرة. يتم استئصال المستعمرات التي انخفضت أو زادت من الغازية ، وتوسيعها ، وإعادة حقنها لتأكيد النمط الظاهري ، وأخيرا ، تحليلها باستخدام تسلسل الإنتاجية العالية.

اكتشاف المنظمين النقيلي باستخدام نموذج الغشاء السريع والكمي داخل الفرخ Chorioallantoic

إن اختبار CAM-Delam لتقييم القدرة النقيلية للخلايا السرطانية سريع نسبيا وسهل ورخيص. يمكن استخدام هذه الطريقة لكشف الآليات الجزيئية التي تنظم تكوين ورم خبيث ولفحص الأدوية. يمكن أن يكون الفحص الأمثل لتحليل عينات الورم البشري طريقة سريرية لعلاج السرطان الشخصي.

فحص CAM-Delam لتسجيل الخصائص النقيلية عن طريق تحديد قدرة التحلل والغزو للخلايا السرطانية

اكتشف تقييم القدرة الإنبثاثية للخلايا السرطانية باستخدام نموذج الغشاء الكوريوني السائل للجنين. يوفر هذا النموذج طريقة سريعة وكمية لدراسة انتشار الأورام في الأبحاث السرطانية.

تحليل الكمي الإنبثاث السرطان باستخدام الأجنة النموذجي الطيور

استكشف المزيد من الفيديوهات