Name: La disección del riñón adultos de pez cebra (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-08-29T12:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 40 s
Description: Aprende la disección del riñón en pez cebra adulto para aislar células renales y hematopoyéticas. Esta técnica permite estudios de expresión génica y trasplante celular en investigación biomédica.

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Deseos RAW agradecer a los miembros de la Zon y Davidson laboratorios de investigación de sus innumerables contribuciones a ayudar a desarrollar estrategias que han ido dado forma a esta técnica de disección en el pez cebra adulto en la última década. Además, deseamos expresar nuestra gratitud a los miembros del personal del Centro de Notre Dame para la Investigación de pez cebra para proporcionar una excelente atención permanente para la cría de nuestra colonia de pez cebra. RAW obtuvo financiación de la investigación de la adjudicación NIH NIDDK conceder DK083512 y de laboratorio generosa financiación inicial de la Universidad de Notre Dame.

1. La disección del riñón adultos de pez cebra a partir de una muestra de animales no fijadas <ol><li> Seleccione un pez cebra adultos entre los 3-6 meses de edad para la disección. </li><li> La eutanasia a los peces mediante la colocación en un plato con tricaína 0,2% 7,0 pH de aproximadamente 4-5 minutos, observando cuidadosamente para ver que las branquias dejan de moverse y el corazón deja de latir. </li><li> Con una cuchara, levantar los peces desde el baño tricaína en una pequeña cantidad de solución, se decanta la solución y suavemente coloque el animal en una toalla de papel. </li><li> Use un par de tijeras afiladas para quitar la disección de la cabeza del animal, haciendo un corte justo detrás del opérculo branquial (Figura 1, la ruta A). Deseche la cabeza en un recipiente para residuos biológicos peligrosos. </li><li> Use las tijeras para abrir la disección del cuerpo del animal, haciendo una incisión ventral largo, a partir de la cabeza y terminando en la cola en la base de la aleta caudal (Figura 1, B ruta). </li><li> Quitar los órganos internos del animal con un par de pinzas de disección / fórceps, y colocarlos en los residuos de riesgo biológico. Tenga cuidado de no cepillar la pared dorsal del cuerpo, ya que este es el lugar de los riñones (Figura 2). Si ha seleccionado un pez hembra, será necesario para sacar los óvulos en desarrollo de la cavidad del cuerpo, que puede ser más fácil de hacer con un par de ángulo de fórceps o pinzas. </li><li> Use agujas de disección para pin abrir las paredes del cuerpo a una bandeja de disección, y el ángulo de las patillas, para que el riñón se puede visualizar. El riñón posee una forma característica (cabeza, tronco / silla de montar, la cola) y el color, se mezcle con la pigmentación de tonalidades negro (Figura 2). También puede ver la aorta llena de sangre periférica, que corre por la línea media de la estructura de los órganos. </li><li> Use unas pinzas finas para separar el riñón de la pared dorsal del cuerpo, utilizando un par de pinzas para levantar el riñón como órgano separado de los tejidos conectivos que lo sustentan. </li><li> Con cuidado, coloque el riñón en el vehículo deseado para estudios de células vivas, tales como un tubo de microcentrífuga que contiene 1x PBS para la preparación de FACS. </li></ol> 2. Preparación y disección del riñón adultos de pez cebra a partir de una muestra de animales fijos <ol><li> Prepare una solución de 4% PBST paraformaldehyde/1X. Hervir la solución para disolver la PFA en la solución, dejar enfriar la mezcla a 4 ° C y añadir 0,1% dimetilsulfóxido. Hemos tenido el mayor éxito con la preservación del tejido recién el uso de soluciones de PFA en comparación con alícuotas congeladas. Hacer una solución suficiente para sumergir el pez cebra adulto durante la disección. </li><li> Llenar una bandeja de disección con una solución de fijación suficiente para sumergir los adultos de pez cebra durante la disección. Llevamos a cabo los pasos siguientes con esta bandeja colocada bajo el microscopio, que puede ser colocado en una campana de productos químicos para minimizar la exposición a los olores de la fijación. </li><li> Seleccione un pez cebra adultos entre los 3-6 meses de edad para la disección. </li><li> La eutanasia a los peces mediante la colocación en un plato con tricaína 0,2% pH 7.0 durante aproximadamente 5 minutos, observando cuidadosamente para ver que las branquias y golpes parar el corazón. </li><li> Con una cuchara, levantar los peces desde el baño tricaína en una pequeña cantidad de solución, se decanta la solución y suavemente coloque el animal en una toalla de papel. </li><li> Use un par de tijeras afiladas para quitar la disección de la cabeza del animal, haciendo un corte justo detrás del opérculo branquial (Figura 1, la ruta A). Deseche la cabeza en un recipiente para residuos biológicos peligrosos, e inmediatamente colocar el animal en la bandeja de disección de PFA que contienen. </li><li> Use las tijeras para abrir la disección del cuerpo del animal, haciendo una incisión ventral largo, a partir de la cabeza y terminando en la cola en la base de la aleta caudal (Figura 1, B itinerario circuito), y mantener el cuerpo parcialmente sumergido durante el procedimiento. </li><li> Quitar los órganos internos del animal con un par de pinzas de disección / fórceps, y colocarlos en los residuos de riesgo biológico. Tenga cuidado de no cepillar la pared dorsal del cuerpo, ya que este es el lugar de los riñones (Figura 2). </li><li> Use agujas de disección para pin abrir las paredes del cuerpo, y el ángulo de las patillas, para que el riñón se puede visualizar. El riñón posee una forma característica (la cabeza, silla de montar, la cola) y el color, se mezcle con la pigmentación de tonalidades negro (Figura 2). También puede ver la aorta llena de sangre periférica, que corre por la línea media de la estructura de los órganos. </li><li> Fijar la muestra durante la noche, la colocación de la bandeja a 4 ° C cuando haya terminado con la organización de las muestras que desee. </li><li> Al día siguiente, retire la solución de PFA de la bandeja y reemplazarla con 1x PBST. </li><li> Use unas pinzas finas para separar cuidadosamente del riñón de la pared dorsal del cuerpo, usando un par de pinzas para levantar el riñón como órgano separado de los tejidos conectivos que lo sustentan. El tejido del riñón será suave y flexible del DMSO en la solución de fijación, por lo que es posible dividir el órgano del riñón entero en una sola pieza. </li><li> Utilice un niveldio pipeta para colocar el riñón en un tubo de microcentrífuga. </li><li> El riñón puede ahora ser tratados posteriormente para llevar a cabo montaje histológicos o en su totalidad in situ estudios de expresión génica basada en el estudio deseado. </li></ol> 3. Los resultados representativos: Los pasos que se esquematiza en la figura 1 indican el procedimiento de disección. El riñón puede ser identificado en base a su característica forma y coloración, y la localización anatómica en la pared dorsal de la cavidad del cuerpo del animal, como se muestra en la Figura 2. Después de la disección de una muestra fija de riñón, montar toda la hibridación in situ se puede utilizar para localizar la expresión de un gen de interés, como se muestra en la Figura 3. <img src="/files/ftp_upload/2839/2839fig1.jpg" alt="Figura 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 1"> Figura 1: Procedimiento que permite el acceso directo para la disección del riñón adulto pez cebra. (A) pez cebra eutanasia se diseca en forma escalonada (indicado por los números y las flechas) para dar al investigador el acceso más fácil a los órganos riñón completo. Las imágenes de la cavidad abdominal antes (B) y después (C) la extracción de los órganos abdominales. <img src="/files/ftp_upload/2839/2839fig2.jpg" alt="Figura 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 2"> Figura 2:. Visualización del riñón del pez cebra en una muestra no fijadas Tras la eliminación de órganos en la cavidad del cuerpo, el riñón aparece como un solo órgano, aplanado que se adhiere a la pared dorsal del cuerpo a través de los tejidos conectivos (A), y ha sido esquematizado (B) para mostrar su forma anatómica. <img src="/files/ftp_upload/2839/2839fig3.jpg" alt="Figura 3" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 3"> Figura 3: Todo el montaje hibridaciones in situ realizadas en el órgano renal del adulto entero. (A) cadherin17 transcripciones se detectan en los túbulos de las nefronas del riñón adulto, ampliada en (A) (B). Transcripciones mafba se localizan proximal tipos de células nefrona en el riñón adulto (en comparación con los túbulos todo en el panel A). (B ' ) Una visión ampliada de expresión mafba revela que las transcripciones son específicamente localizada en el podocito (P), las células de la sangre del filtro (glomérulo) y túbulo contorneado proximal (PCT).

<ol><li>Stocum, D. L., Zupanc, G. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stretching+the+limits%3A+stem+cells+in+regeneration+science%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Dyn%22%5BJournal%5D)">Stretching the limits: stem cells in regeneration science.</a> Dev. Dyn. 237, 3648-3671 (2008).</li>
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</ol>

No hay conflictos de interés declarado.

Las células madre adultas son componentes dinámicos y esenciales que mantienen la forma del cuerpo adulto 1. Las células madre adultas también pueden servir para contrarrestar los daños en que incurra el cuerpo durante los estados de enfermedad y la disfunción o pérdida de las células madre adultas pueden llevar a la disminución de la función del órgano y se ha implicado a la unidad de neoplasias malignas y contribuyen al envejecimiento. Las células madre adultas tienen propiedades celulares que los distinguen de otros tipos de células diferenciadas. Tras la división celular, las células madre adultas son capaces de auto-renovación y la producción de células progenitoras que, a su vez puede dar lugar a la descendencia diferenciada distintas. Existe un gran interés en la comprensión de las vías que regulan las decisiones del destino celular y la potencia de las células madre adultas, debido a su importante papel en la homeostasis del tejido 1. Por ejemplo, muchos científicos en la actualidad tratan de identificar las señales que mantienen diferentes poblaciones de células madre adultas en su nicho o microambiente especializado, y cómo este lugar se ve afectada por factores humorales. Adulto las células madre hematopoyéticas (HSC) son células pluripotentes que impulsan la renovación continua de las células de la sangre en los animales 8. La hematopoyesis es un proceso dinámico que está constantemente en curso durante la vida de un organismo vertebrado por la madurez tipos diferenciados de células sanguíneas son de corta duración y por lo tanto deben ser reemplazados regularmente. Cuando se dividen, HSCs satisfacer esta demanda fundamental de auto-renovación y la producción de una serie de células progenitoras que dan origen a los eritrocitos, los linajes de megacariocitos, linfoides y mieloides. Cada uno de estos tipos de células sanguíneas realiza funciones únicas en la circulación, incluido el suministro de gas a cambio de tejido, una forma para el sellado de las lesiones de los vasos sanguíneos a través de la formación de coágulos, o los mecanismos de defensa contra los patógenos invasores. Mientras que las CMH se han reconocido durante muchos años, una gran cantidad de preguntas fascinantes siguen sin respuesta acerca de estas células increíble. Estudios recientes han identificado las subclases de HSCs con distintas a largo plazo de renovación de auto-propiedades, y el esclarecimiento de los componentes del nicho de mercado y las señales que modulan el comportamiento de HSC 8. El pez cebra es ahora uno de los pilares de la hematopoyesis paradigmas de la investigación, en base a los atributos genéticos y moleculares de este modelo animal 8. Investigación utilizando el pez cebra ha dado lugar a nuevos conocimientos sobre la biología de HSC que se conservan en los vertebrados superiores como los mamíferos, destacando la relevancia de las investigaciones biomédicas sangre de pescado 8. Históricamente, el conocimiento sobre las CEH ha allanado el camino para las expediciones que buscan descubrir si otros órganos del cuerpo son mantenidos por las células madre adultas. Numerosas poblaciones de células madre adultas están apreciado que existen, que van a través de diversas estructuras del cerebro con el intestino, la piel y el músculo esquelético. Continuos esfuerzos en el campo de células madre tratan de determinar cómo las células madre adultas y los tipos diferenciados hasta otras células pueden mostrar mayor potencia en diversos entornos. Con respecto a los riñones, no ha habido un gran debate entre los nefrólogos en cuanto a si las células madre existen renal 16. Investigaciones independientes han documentado poblaciones de células de riñón de los mamíferos que poseen distintos grados de potencial regenerativo, pero una comprensión coherente de estos informes aún no se ha logrado. Curiosamente, hay pruebas sólidas para apoyar la idea de que muchas especies de peces poseen células que pueden alimentar con firmeza la regeneración de las nefronas dañadas, así como crecer nefronas totalmente nuevo en la edad adulta 9. Trabajos recientes han identificado las características moleculares de las células del riñón adulto madre en el pez cebra 10,11, y demostró la potencia de auto-renovación de los llamados renal células madre / progenitoras (RPC) 11. Se necesitan más estudios para determinar si las células del riñón análogos están presentes en los mamíferos. Sin embargo, continuaban las investigaciones sobre los mecanismos celulares y moleculares que regulan la RPC de pescado puede dar una idea de cómo hazañas regenerativa puede ser estimulada en el riñón de mamífero. Es evidente que aún queda mucho por comprender acerca de RPC, y que las muchas herramientas disponibles para el investigador del pez cebra pueden ser implementadas para abordar estas cuestiones intrigantes. En este protocolo, que describe nuestro método para la identificación anatómica y la disección del riñón adultos de pez cebra. Medidas alternativas se pueden utilizar para analizar el riñón, como la apertura de la cavidad abdominal con una incisión ventral con tijeras de disección, sin embargo, nos hemos encontrado con más éxito en el acceso a todo el riñón cuando la pared abdominal se fija abierta y la cabeza se retira. Investigadores de la sangre y son del mismo tipo que desean aislar y trabajar con estos tipos de células pueden utilizar cualquiera de los métodos de disección. Cabe señalar que el método se describe para el aislamiento y working con el riñón en los adultos de pez cebra no se limita a los científicos que deseen realizar preguntas de la biología de células madre adultas, como la disección de este órgano puede facilitar los estudios a los investigadores llevar a cabo investigaciones sobre temas que van desde la fisiología del envejecimiento. Además, este método puede ser complementado con otras tecnologías como los transgénicos, con el fin de la etiqueta molecular y luego purificar y estudiar las subpoblaciones discretas de células sanguíneas o de riñón de tipo salvaje o genéticamente pez cebra mutante 11. Mirando hacia el futuro, como los procesos de purificación detallada de los tipos de células madre y progenitoras es vital para obtener conocimiento acerca de cómo se regula su comportamiento, como las pruebas de funcionamiento, tales como el trasplante de progenitores o cultivo constituyen la base sobre la cual la potencia y la identidad de estas células se define. Los avances recientes en métodos progenitoras hematopoyéticas cultura abrir muchas nuevas vías de estudio, y puede ser adaptado para el cultivo de las poblaciones renal 17. Pez cebra genética química han tenido éxito en la identificación de las vías que modulan HSCs y progenitores renal en diversos contextos 18-20, y seguirá siendo una vía útil para poner a prueba en combinación con las técnicas de biología por encima de la celda. En su conjunto, ha habido una serie de aportaciones innovadoras en los campos de la hematología y la nefrología con el modelo de pez cebra, y continuó la investigación en estos ámbitos se compromete a ejercer otras ideas de transformación en los próximos años.

<table border="1"><tbody><tr><th> Nombre del reactivo </th><th> Empresa </th><th> Número de catálogo </th></tr><tr><td> Tijeras de disección </td><td> Roboz </td><td> RS-5882 </td></tr><tr><td> Pinzas de disección </td><td> Roboz </td><td> RS-5010 </td></tr><tr><td> Disección ángulo fórceps </td><td> Roboz </td><td> RS-5058 </td></tr><tr><td> Tricaína </td><td> Sigma </td><td> E10521 </td></tr><tr><td> Paraformaldehído </td><td> Electron Microscopy Servicios </td><td> 19210 </td></tr></tbody></table>

la disección del riñón adultos de pez cebra

Dissection of the Adult Zebrafish Kidney

Los investigadores que trabajan en el floreciente campo de la biología de células madre adultas tratar de entender las señales que regulan el comportamiento y la función de las células madre durante la homeostasis normal y los estados de enfermedad. La comprensión de las células madre adultas tiene amplias implicaciones de largo alcance para el futuro de la medicina regenerativa 1. Por ejemplo, un mejor conocimiento sobre la biología de células madre adultas pueden facilitar el diseño de estrategias terapéuticas en las que los órganos se activan para curarse a sí mismos o incluso la creación de métodos de órganos en crecimiento in vitro que pueden ser transplantados a los humanos 1. El pez cebra se ha convertido en un modelo animal de gran alcance para el estudio de la biología de las células de vertebrados 2. Ha habido una amplia documentación y análisis del desarrollo embrionario en el pez cebra 3. Sólo recientemente los científicos han tratado de documentar la anatomía y técnicas quirúrgicas de adultos disección 4, ya que ha habido un movimiento progresista dentro de la comunidad de pez cebra para ampliar las aplicaciones de este organismo de investigación para los estudios en adultos. Por ejemplo, hay expansión de los intereses en el uso de pez cebra para investigar la biología de poblaciones de células madre adultas y hacer modelos sofisticados para adultos de enfermedades como el cáncer 5. Históricamente, el aislamiento del riñón en los adultos de pez cebra ha sido fundamental para el estudio de la hematopoyesis, como el riñón es la localización anatómica de la producción de células sanguíneas en el pescado 6,7. El riñón está compuesto de unidades nefrona funcional se encuentra en los acuerdos arborized, rodeado de tejido hematopoyético que se dispersa a través de los espacios intermedios. El componente hematopoyético se compone de células madre hematopoyéticas (HSC) y sus descendientes que habitan en el riñón hasta que diferenciar terminal 8. Además, ahora se aprecia que un grupo de la función renal células madre / progenitoras (RPC) también habitan en el órgano del riñón del pez cebra y permitir la regeneración del riñón y el crecimiento, como se observa en otras especies de peces 11.09. A la luz de este nuevo descubrimiento, el riñón del pez cebra es un órgano que alberga la ubicación de dos grandes oportunidades para los estudios de biología de células madre adultas. Está claro que muchas cuestiones pendientes podría ser un buen servicio con este sistema experimental. Para alentar la expansión de este campo, es beneficioso para documentar los métodos detallados de visualizar y luego aislar a los órganos del pez cebra riñón adulto. Este protocolo detalla nuestro procedimiento para la disección del riñón en los adultos tanto de animales no fijadas y fijo. La disección de los órganos renales se puede utilizar para aislar y caracterizar las células madre hematopoyéticas y renal y su descendencia mediante técnicas establecidas, como la histología, la fluorescencia de clasificación de células activadas (FACS) 11,12, 13,14 perfiles de expresión, y el trasplante 11,15. Esperamos que la difusión de este protocolo se proporcionará a los investigadores con los conocimientos necesarios para poner en práctica un uso más amplio de los estudios de pez cebra que en última instancia, puede ser traducido para la aplicación humana.

El riñón del pez cebra es el hogar de los renales y hematopoyéticas adultas células madre / progenitoras, y representa una oportunidad excepcional para estudiar estos tipos de células y su progenie en un organismo modelo de vertebrados. En este sentido, demostrar un procedimiento de disección detallada que permite al investigador identificar y extirpar el riñón del pez cebra adulto, que puede ser utilizado para aplicaciones tales como el aislamiento de células, los trasplantes, y los estudios de expresión de los riñones y / o poblaciones de células sanguíneas.

La disección del riñón adultos de pez cebra

Los investigadores que trabajan en el campo floreciente de la biología de las células madre adultas buscan comprender las señales que regulan el comportamiento y la función de las células madre...

El objetivo general de este procedimiento es identificar y extirpar quirúrgicamente el riñón de un pez cebra adulto, que puede utilizarse para aplicaciones como el aislamiento celular, el trasplante y los estudios de expresión de poblaciones de células renales y/o sanguíneas. Esto se logra primero seleccionando un pez cebra adulto de entre tres y seis meses de edad para la disección. Luego, el animal se sacrifica en trica al 0,2 %, confirmando la eutanasia cuando dejan de moverse las branquias y el corazón deja de latir.El tercer paso del procedimiento consiste en utilizar tijeras de disección para abrir la cavidad abdominal y extraer los órganos ubicados dentro de ella. El paso final del procedimiento consiste entonces en utilizar pinzas de disección finas para extraer el riñón de los tejidos conectivos subyacentes. En última instancia, los perfiles de expresión génica de subpoblaciones celulares hematopoyéticas o renales, así como el aislamiento de poblaciones celulares específicas mediante montaje completo.La hibridación in situ, los análisis inmunohistoquímicos y/o la clasificación de células por fluorescencia se pueden realizar en el tejido u órganos aislados y/o en células. La demostración visual de este método es fundamental, ya que los pasos de la disección son difíciles de aprender. Debido a que el riñón de un pez cebra es un órgano delicado que se encuentra anclado a la pared corporal mediante un tejido conectivo denso.Las implicaciones de esta técnica pueden utilizarse en la terapia o el diagnóstico de enfermedades renales y sanguíneas en humanos, ya que los procesos biológicos están altamente conservados entre el pez cebra y los mamíferos superiores. En los últimos años se han desarrollado numerosas herramientas genéticas y moleculares en el pez cebra, convirtiéndolo en un modelo animal útil. Lo suficientemente pobre, 0.2% trica para cubrir un pez cebra adulto de entre tres y seis meses de edad en un recipiente.Luego, seleccione un pez cebra para la disección y colóquelo en la placa durante aproximadamente cinco minutos, observando cuidadosamente que dejen de moverse las branquias y que el corazón deje de latir. A continuación, use una cuchara para sacar el pez del baño de trica junto con una pequeña cantidad de solución. Vierta la solución y coloque suavemente el animal sobre una toalla de papel utilizando un par de tijeras de disección afiladas.Realice un corte justo detrás de las branquias, corte para eliminar la cabeza del animal y deseche la cabeza en un recipiente de desecho biopeligroso. Luego, comenzando desde la cabeza, use las tijeras de disección para hacer una incisión ventral larga que finalice en la cola, con el fin de abrir el cuerpo del animal. Ahora retire los órganos internos del animal utilizando un par de pinzas de disección y colóquelos en el desecho biopeligroso.Tenga cuidado de no tocar la pared corporal dorsal, ya que esta es la ubicación del riñón. Si ha seleccionado un pez hembra, retire con cuidado los embriones en desarrollo de la cavidad corporal utilizando una pinza o unas pinzas en ángulo. Utilice agujas de disección para fijar las paredes corporales a una bandeja de disección.Coloque las agujas de modo que se pueda visualizar el riñón. El riñón posee una forma característica con una cabeza, un tronco o silla, una cola, y un color distintivo intercalado con pigmentación de tono negro. Utilice dos pares de pinzas finas para separar el riñón de la pared corporal dorsal.Utilice un par de pinzas para levantar el riñón y otro par para sostener el tejido conectivo subyacente. Al retirar el órgano de la cavidad corporal del pez cebra, coloque suavemente el riñón en el medio deseado. Para estudios posteriores de células vivas, como un microcentrifugador, utilice un tubo que contenga PBS al uno por uno. Para la preparación de fijación, llene una bandeja de disección con suficiente solución de fijación recién preparada para sumergir un pez cebra de tres a seis meses de edad durante la disección.Luego vierta suficiente trica al 0,02 % pH siete en un recipiente. Para cubrir al pez cebra, seleccione un pez cebra para la disección y colóquelo en el recipiente con trica para la eutanasia. Mueva y deseche la cabeza del animal como se mostró anteriormente, pero esta vez coloque inmediatamente el animal en la bandeja de disección que contiene PFA.Después de la extracción, manteniendo el cuerpo parcialmente sumergido en el fijador durante el procedimiento, use tijeras de disección para abrir el cuerpo del animal mediante una incisión ventral como antes. Nuevamente, teniendo cuidado de no tocar la pared dorsal del cuerpo, retire los órganos internos del animal utilizando un par de pinzas de disección. Coloque los órganos en un recipiente para residuos biopeligrosos.Como antes, utilice agujas de disección para sujetar abiertas las paredes corporales, colocando las agujas en ángulo para poder visualizar el riñón. A continuación, fije la muestra durante toda la noche. Al día siguiente, coloque la bandeja a cuatro grados Celsius, retire la solución fijadora de la bandeja y sustitúyala por PBST al uno por ciento.Luego, como antes, desprenda cuidadosamente el riñón de la pared corporal dorsal utilizando un par de pinzas para levantar todo el órgano renal en una sola pieza mientras lo separa de los tejidos conectivos que se encuentran debajo. A continuación, utilice una pipeta de transferencia de gran orificio para colocar el riñón en un tubo microcentrífugo para su posterior procesamiento. Como se muestra aquí, tras la extracción de los órganos en la cavidad corporal, el riñón aparece como un órgano aplanado individual que se adhiere a la pared corporal dorsal mediante tejidos conectivos.En esta figura, el riñón se ha representado esquemáticamente para mostrar su forma anatómica característica. Aquí se pueden observar los transcritos de kadin 17 detectados mediante hibridación completa con C dos en el riñón, visibles en el túbulo de los nefrones del riñón adulto, con una vista ampliada de la tinción del túbulo mostrada en el panel derecho. En esta figura, puede observarse en el panel izquierdo que los transcritos de M-A-F-B-A se localizan en tipos celulares del nefrón proximal en el riñón adulto.La vista ampliada de la expresión de M-A-F-B-A, tal como se visualiza a la derecha, revela que los transcritos están localizados específicamente en las células podocitarias de los gliomas, indicado por la letra p y la flecha, y en el túbulo contorneado proximal, indicado por la abreviatura PCT y el corchete. Al realizar este procedimiento, es importante recordar extraer con cuidado los órganos internos del pez cebra adulto para no dañar el riñón antes de su aislamiento quirúrgico tras seguir este procedimiento. Otros métodos, como la histología o la clasificación de células activada por fluorescencia, pueden utilizarse para evaluar las características ultraestructurales de las poblaciones celulares de sangre y riñón o para aislar poblaciones específicas destinadas a trasplante celular o cultivo celular primario.

Research

Investigación

JoVE Journal

Biology

Biología

El trasplante de médula del riñón entero en adultos de pez cebra

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El trasplante de células es una técnica fundamental para el estudio de la regeneración de tejidos y para el desarrollo de terapias basadas en células de la enfermedad. Se demuestra aquí una técnica de microcirugía que permite el trasplante de células genéticamente etiquetados directamente en el riñón de peces adultos de pez cebra.

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Aquí presentamos un método fiable para estudiar la regeneración renal adulta mediante la inducción de una lesión renal aguda mediante la inyección de gentamicina. Demostramos que la lesión depende de la dosis de gentamicina y de la temperatura ambiental utilizando hibridación in situ para marcar lhx1a+ desarrollando nuevas nefronas.

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El método aquí descrito permite realizar un análisis cronológico del desarrollo de órganos en embriones de pez cebra mediante el uso de un microscopio de fluorescencia de disección capaces de realizar seccionamiento óptico y estrategias simples de reajuste para corregir la deriva focal y plana.

Análisis para el Desarrollo de riñón de pez cebra con time-lapse de uso de un microscopio de disección equipado para seccionamiento óptico

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Hepatectomía parcial en pez cebra adulto

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