Agua Morris laberinto de prueba para los déficits de aprendizaje y memoria en ratones de Alzheimer modelo de enfermedad

El objetivo general del siguiente experimento es evaluar el aprendizaje y la memoria dependientes del hipocampo. El primer día, el ratón se entrena para encontrar una plataforma con bandera elevada que se coloca aleatoriamente en un charco de agua clara para permitir que el ratón aprenda que la tarea tiene un punto final evasible. Como segundo paso, el ratón se entrena en los días siguientes soltándolo en un charco de agua opaca desde diferentes posiciones con la plataforma sumergida y fija en un lugar.

Esto permite que el ratón aprenda la ubicación de la plataforma mediante el uso de las señales circundantes. A continuación, se retira la plataforma el último día y se realiza un seguimiento del patrón de natación del ratón durante un minuto para acceder a la adquisición de tareas. Y así, se obtienen resultados de aprendizaje y memoria.

Eso muestra deficiencias en el aprendizaje espacial y la memoria basadas en las latencias de escape y la longitud de la ruta observada en las tres condiciones de prueba diferentes. La principal ventaja de esta técnica sobre las masas existentes es que es relativamente sencillo diferenciar entre las condiciones especiales de plataforma oculta y las no especiales de plataforma visible. Por lo general, las personas nuevas en este método pueden tener dificultades porque es sensible al manejo experimental.

Debe asegurarse de que los ratones no estén estresados durante los procedimientos, esto podría afectar los resultados. La demostración de este procedimiento será la Sra. Kelly Bromley respira y los estudiantes graduados de Miss Suecia de mis laboratorios primero aseguran una piscina circular. Si los ratones experimentales son negros, use una piscina blanca y si los ratones son blancos, use una piscina negra. Ahora.

Organice la habitación con divisores de manera que los animales que se están probando no vean al experimentador durante el lugar de prueba. Señales espaciales de alto contraste sobre la habitación y el interior de la piscina en una ubicación que estará por encima de la superficie del agua. Llene la piscina con agua y equilibre a temperatura ambiente.

Luego coloque una plataforma de 10 centímetros de diámetro en la piscina, un centímetro por encima de la superficie del agua, blanca para una piscina blanca o plexiglás transparente para una piscina negra. Calibre la piscina en el software de la computadora para que la cámara pueda crear información de distancia física. A partir de información basada en píxeles.

Divide la piscina en cuatro cuadrantes. Especifique la zona de la plataforma como una zona variable, que puede cambiar con cada prueba. A continuación, cree cinco subzonas de plataforma, una en cada cuadrante y otra en el centro de la piscina.

Guarde la calibración y utilícela para los días de prueba restantes. A continuación, establezca el tiempo máximo de prueba en 60 segundos. Si el ratón encuentra la plataforma antes de este tiempo, programe el software para que detenga la versión de prueba cuando se encuentre la plataforma.

Especifique también el programa para que comience el seguimiento automáticamente cuando el experimentador salga del área de prueba. Utilice cualquier opción de minimización de reflejos que proporcione el paquete de software. Por último, realice un seguimiento de la ruta, la longitud, el escape, la latencia y el tiempo empleado en cada cuadrante.

El día de la prueba, transfiera a los ratones de su alojamiento a la sala de comportamiento en un área donde no puedan ver la piscina o las señales espaciales. Deje que se adapten al nuevo entorno durante al menos 30 minutos. Antes de realizar la prueba, cargue la calibración de la piscina en el software de seguimiento.

Cree cinco ensayos con un programa de intervalos entre ensayos adecuado, la ubicación de la plataforma y la dirección de inicio para que difieran con cada ensayo. Coloca una bandera en la plataforma para aumentar su visibilidad. Para comenzar la prueba, levante el ratón de la jaula de inicio por la base de la cola, sosteniendo al ratón durante la transferencia al área de prueba.

A continuación, coloque suavemente el ratón en el agua mirando hacia el borde de la piscina. Abandone rápidamente el área de prueba. Si el ratón encuentra la plataforma antes del corte 62, permita que el ratón permanezca en la plataforma durante cinco segundos y luego devuélvalo a su jaula de origen.

Si el ratón no encuentra la plataforma, colóquelo en la plataforma y permita que permanezca allí durante 20 segundos antes de devolverlo a su jaula de origen. Repita el procedimiento para todos los ratones del ensayo. Comience cada prueba subsiguiente con una ubicación de plataforma diferente y una dirección de inicio de acuerdo con el software del programa.

Cuando se completen las pruebas, regrese los ratones a su alojamiento en preparación para el día siguiente. Retire la bandera de la plataforma y agregue agua adicional a la piscina para sumergir la plataforma a un centímetro por debajo de la superficie. Cargue la calibración del grupo en el software de seguimiento y cree cinco ensayos con un intervalo entre ensayos adecuado.

A continuación, programe la ubicación de la plataforma para que permanezca en la misma posición durante todas las pruebas y días, pero que la dirección de inicio difiera con cada prueba cada día. Para los ratones negros, agregue pintura templada blanca en polvo no tóxica a la piscina y mezcle bien. Use suficiente pintura para que la plataforma sumergida no sea visible desde la superficie del agua.

Proceda a probar ratones individuales en el agua como se describió anteriormente para la prueba de sondeo final. Cargue la calibración de la piscina en el software de seguimiento. Cree una prueba sin zona de plataforma y con una dirección de inicio.

Preferiblemente la dirección de inicio más alejada del cuadrante de la plataforma utilizada en los días dos a cinco. También establece la longitud del sendero en 60 segundos. Ahora retire la plataforma de la piscina y pruebe ratones individuales en el agua como se describió anteriormente para cada día y cada ratón promedie las cinco pruebas para obtener una sola longitud de ruta y latencia de escape para cada sujeto de prueba.

Además, analice e interprete los datos como se detalla en el manuscrito adjunto utilizando el laberinto acuático de Morris. Se probaron ratones transgénicos PP 23 durante siete meses portadores del gen PP mutante sueco A humano después de un mes de inyecciones diarias de ácido valproico o solución vehicular durante el primer día de pruebas en plataforma visible. Los ratones A PP 23 tratados y controlados con VPA mostraron una latencia similar para escapar a la plataforma visible.

Los ratones PP 23 tratados y controlados por el VPA tenían distancias de natación similares antes de escapar a la plataforma visible. En la prueba de plataforma visible en pruebas de plataforma oculta en el tercer y cuarto día, los ratones tratados con VPA 23 mostraron una latencia más corta para escapar a la plataforma oculta. En el tercer y cuarto día, el VPA trató a un ratón PP 23 que tenía una longitud de natación más corta antes de escapar a la plataforma oculta.

En el ensayo de sonda del sexto día, en comparación con los ratones de control, el VPA trató a un PP 23, los ratones viajaron significativamente más veces al tercer cuadrante donde se colocó previamente la plataforma oculta. Al intentar este procedimiento es importante recordar monitorear los factores ambientales que pueden causar estrés, como el ruido, la temperatura y la luz. Siguiendo este procedimiento, se pueden realizar otros métodos, como el condicionamiento del miedo en cola y contextual, para responder a preguntas adicionales, como si los déficits de aprendizaje son específicos del hipocampo o si son parte de un problema neurocognitivo más amplio, que puede incluir la amígdala.