Name: Agua Morris laberinto de prueba para los déficits de aprendizaje y memoria en ratones de Alzheimer modelo de enfermedad (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-07-20T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 2 s
Description: Aprende a evaluar déficits de aprendizaje y memoria en modelos de Alzheimer mediante el laberinto de agua de Morris en ratones. Este método permite analizar la función hipocampal y los efectos de tratamientos farmacológicos.

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Este trabajo fue financiado por los Institutos Canadienses de Investigación en Salud (CIHR), la familia Townsend, y Brown y Jack Investigación de la Familia Alzheimer de la Fundación (a WAS). WS es el titular de la Cátedra de Investigación de Canadá en la enfermedad de Alzheimer. PL fue apoyado por una NSERC Premio Alexander Graham Bell Canada Becas de Posgrado de Investigación Doctoral y un Michael Smith Fundación para la Beca de Investigación en Salud de Posgrado Superior.

1. Preparación <ol><li> Equipo de preparación <ol><li> Obtener una piscina circular con un diámetro de 150 cm y una profundidad de 50 cm (Fig. 1). Si el uso de ratones negro, un grupo blanco se debe utilizar, si se utiliza el ratón blanco, un charco negro se debe utilizar. </li><li> Organizar la sala de tal manera que el animal se está probando no puede ver el experimentador durante la prueba. Esto se puede lograr con cortinas o mamparas. </li><li> Coloque las señales de alto contraste espacial de la habitación, y / o en el interior de la piscina en un lugar que estaría por encima de la superficie del agua. </li><li> Coloque una plataforma de 10 cm de diámetro en la piscina - blanco para una piscina de color blanco, de plexiglás transparente de un charco negro. Llenar la piscina con el agua hasta que la plataforma es de 1 cm por encima de la superficie del agua. Deje que el agua alcance la temperatura ambiente (22 ° C). Dependiendo de la temperatura del agua que puede tomar de uno a tres días, o alternativamente de agua caliente se puede agregar a acelerar el equilibrio. </li></ol></li><li> Software de preparación de <ol><li> Calibrar la piscina en el software del ordenador para que la cámara puede crear información de la distancia física de la información basadas en píxeles. Divida el grupo en 4 cuadrantes. Especificar la zona de la plataforma como una zona de variables que pueden cambiar con cada ensayo. Crear cinco subzonas de la plataforma - una en cada cuadrante, y uno en el centro de la piscina. Guardar la calibración y el uso que para el resto de días de prueba. (Ver Fig. ejemplo. 2). </li><li> Establecer el tiempo de la prueba máxima de 60 seg. Si el ratón se encuentra la plataforma antes de este tiempo, el programa de software para detener el ensayo cuando la plataforma se encuentra. </li><li> Especificar el programa para comenzar el seguimiento de forma automática, cuando el experimentador sale de la zona de pruebas. Utilizar cualquier "reflejo la reducción al mínimo" las opciones de su paquete de software proporciona. </li><li> Longitud de la pista camino, la latencia de escape, y el tiempo dedicado en cada cuadrante. </li></ol></li></ol> 2. Día 1: Plataforma Visible <ol><li> Programa de ordenador <ol><li> Cargar la calibración de la piscina en el software de seguimiento. </li><li> Crear cinco ensayos, con un intervalo entre ensayos apropiados para su experimento. Programa de la localización de la plataforma y la dirección de partida difieran con cada ensayo. Ver Tabla 1 para un protocolo de ejemplo. </li></ol></li><li> El procedimiento de prueba <ol><li> La transferencia de los ratones de sus facilidades de vivienda a la sala de conducta. Mantener a los ratones en una zona donde no pueden ver la piscina o el entorno espacial. Vamos a adaptarse al nuevo entorno por lo menos 30 minutos antes del ensayo. </li><li> Colocar una bandera en la plataforma para aumentar su visibilidad. </li><li> Para comenzar la prueba, levantar el ratón de la jaula por la base de la cola. Apoyar el mouse a medida que llega a la zona de pruebas. Levantar el ratón por la base de la cola, coloque suavemente el ratón en el agua, frente a la orilla de la piscina. Rápidamente salir de la zona de pruebas. </li><li> Si el ratón se encuentra la plataforma antes de la 60 segundos de corte, permiten el ratón para permanecer en la plataforma de 5 segundos y luego devolverlo a su jaula. Si el ratón no se encuentra la plataforma, coloque el ratón en la plataforma y permitir que permanezca allí durante 20 segundos antes de volver a su jaula. </li><li> Repita este procedimiento para todos los ratones en el camino. Comience cada estudio posterior con una localización de la plataforma y dirección diferentes de partida, como usted ha programado en su software. </li><li> Cuando finalice la prueba, volver a los ratones a los servicios de vivienda. Los ratones se secó y normotermia está asegurada antes de regresar a las instalaciones de los animales. </li><li> En preparación para el día siguiente, quite la bandera de la plataforma y agregue más agua a la piscina para sumergir la plataforma de 1 cm por debajo de la superficie. </li></ol></li></ol> 3. Días 2-5: plataforma oculta <ol><li> Programa de ordenador <ol><li> Cargar la calibración de la piscina en el software de seguimiento. </li><li> Crear cinco ensayos, con un intervalo entre ensayos apropiados para su experimento. Programa de la localización de la plataforma de permanecer en la misma posición en todas las pruebas y los días, pero la dirección de partida son diferentes en cada prueba, cada día. </li></ol></li><li> El procedimiento de prueba <ol><li> Para los ratones negro, añade que no es tóxico, pintura blanca, en polvo temperatura de la piscina y mezclar bien. Use suficiente pintura de tal manera que la plataforma sumergida no es visible desde la superficie del agua. Para ratones blancos, un charco negro con agua limpia y una plataforma de plexiglás transparente debe ser utilizado. </li><li> Siga los pasos 2.2.3 a 2.2.6. </li></ol></li></ol> 4. Día 6: Sonda de prueba <ol><li> Programa de ordenador <ol><li> Cargar la calibración de la piscina en el software de seguimiento. </li><li> Crear una prueba con ninguna zona de la plataforma, y ​​una dirección de partida. La dirección de partida más lejano del cuadrante plataforma utilizada en los días 2-5 se prefiere. Establecer la longitud de pista a 60 segundos. </li></ol></li><li> El procedimiento de prueba <ol><li> Retire la plataforma de la piscina. </li><li> Siga los pasos 2.2.3 a 2.2.6. </li></ol></li></ol> 5. Análisis de los datos <ol><li> Para cada día y cada media del ratón, el 5 pruebas para dar una longitud de trayectoria única y la latencia de escape para cada sujeto de la prueba. Calcular el error combinado adecuadamente. Para el día 6, sólo tiene que recoger la longitud del camino, la latencia de escape, y el tiempo invertido en el cuadrante de la plataforma para cada ratón. </li><li> Si existe cualquier diferencia entre los grupos en el día 1, lo más probable es un problema de visión en lugar de aprendizaje y la memoria. Sólo procederá con el análisis si no se observan diferencias en el día 1. </li><li> Comparar las curvas de aprendizaje para los días 2-5 con estadísticas apropiadas para el conjunto de datos. Una curva más pronunciada representa más rápida adquisición de la tarea; una curva menos profunda representa un déficit en la adquisición de la tarea. Los datos del día 2 al día 5 se analizan mediante ANOWA. </li><li> Para el día 6, comparar el porcentaje de tiempo en el cuadrante de la plataforma previamente aprendidas, utilizando las estadísticas apropiadas para el conjunto de datos. Un mayor porcentaje de tiempo en el cuadrante de la plataforma se interpreta como un mayor nivel de retención de la memoria. </li></ol> 6. Resultados representante Hemos utilizado la prueba del laberinto acuático de Morris para examinar el efecto hipoxia sobre patogénesis de la EA (7) y el ácido valproico (VPA) 's potencial farmacéutico para el tratamiento de EA (6) en ratones transgénicos modelo de AD. La Figura 3 es el resultado representativo que en nuestro estudio sobre el efecto de VPA en los déficits de memoria en el modelo AD APP23 ratón (6). El día 1 (pruebas visibles de la plataforma), no hay diferencia entre el VPA grupos de tratamiento y de control de la latencia (Fig. 3A) y la longitud del camino (Fig. 3) lo que indica que ambos grupos tienen motor similar y las capacidades visuales. De esto podemos suponer que los ratones son capaces de ver la bandera de la plataforma y las pistas en los alrededores de medio ambiente, y pueden nadar aceptablemente. Para los días 2-5 (Día 1 a 4 de los ensayos plataforma oculta), el ejemplo muestra una diferencia en la latencia de escape (Fig. 3C) y longitud de la trayectoria (Fig. 3D) entre los grupos, lo que sugiere que los ratones tratados con VPA se desempeñaron significativamente mejor que los controles con el tiempo. Los resultados rastro de la sonda en el último día (día 6) muestran que el número de veces que los ratones viajaron en el tercer cuadrante, donde se colocó la plataforma oculta con anterioridad, fue significativamente mayor con el tratamiento con VPA en comparación con el control (Fig. 3E). Estos datos indican que el tratamiento con VPA mejora significativamente el déficit de la memoria se ve en APP23 ratones. <img src="/files/ftp_upload/2920/2920fig1.jpg" alt="Figura 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 1"> Figura 1. La configuración del equipo para el agua de Morris laberinto visible días plataforma de pruebas. La piscina está a salvo de que el experimentador con separadores de ambiente. Entorno espacial se encuentran en las paredes, y tal vez colocado en el interior de la piscina, por encima de la superficie del agua, si lo desea. La piscina se llena de agua clara, con la plataforma situada 1 cm por encima de la superficie. Una bandera se ha colocado en la plataforma para mejorar la visibilidad. <img src="/files/ftp_upload/2920/2920fig2.jpg" alt="Figura 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 2"> Figura 2. Captura de pantalla del laberinto-Cualquier ™ Sistema de Seguimiento de vídeo que demuestra la calibración de la piscina. La piscina se ve desde arriba por una cámara de seguimiento en blanco y negro analógico con un digitalizador RTV24. Varias zonas se definen en el software y el total se divide en cuatro cuadrantes. Una quinta, zona de la plataforma se introduce que puede variar entre los ensayos, con cinco ubicaciones posibles: NO, NE, SW, SE o Centro. Una línea de calibración (línea marcada en el centro) se agrega para permitir que el software para convertir distancias de píxeles en las distancias físicas. <img src="/files/ftp_upload/2920/2920fig3.jpg" alt="Figura 3" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 3"> Figura 3. Los resultados representativos para el laberinto acuático de Morris. El 7 meses APP23 ratones transgénicos portadores de genes humanos mutantes sueco APP fueron probados después de un mes de la vida diaria VPA (n = 30 ratones) o una solución vehículo (n = 30 ratones) inyecciones. (A) Durante el primer día de pruebas de la plataforma visible, el VPA tratamiento y control de ratones expuestos APP23 una latencia similar a escapar a la plataforma visible. P&gt; 0,05 por estudiante de la t-test. (B) El VPA-tratamiento y de control APP23 ratones tenían similares distancias de natación antes de escapar a la plataforma visible en la prueba de plataforma visible. P&gt; 0,05 por estudiante de la t-test. (C) En las pruebas de plataforma oculta, VPA tratados APP23 ratones mostraron una latencia más corta para escapar a la plataforma oculta en el 3 º y 4 º día, P &lt;0,001 por ANOVA. (D) VPA-tratados APP23 ratones tenía una longitud más corta nadar antes de escapar a la plataforma oculta en el 3 º y 4 º día, P &lt;0.01 por ANOVA. (E) En el ensayo de la sonda en el día sexto, el VPA-tratados APP23 ratones viajó en el tercer cuadrante, donde se colocó la plataforma oculta anteriormente, los tiempos significativamente más que los controles. * P &lt;; 0,005 por estudiante de la t-test. (Adaptado y reimpreso de la Revista de Medicina Experimental 205, 2781-2789, 2008, Rockefeller University Press, publicado originalmente en J. Exp Med doi:... 10.1084/jem.20081588) (6). <table border="1"><tbody><tr><td> </td><td colspan="2"> Día 1 </td><td> Día 2 </td><td> Día 3 </td><td> Día 4 </td><td> Día 5 </td><td> Día 6 </td></tr><tr><td></td><td> Plataforma de localización </td><td> Dirección de partida </td><td colspan="4"> Ubicación de la plataforma: SW ubicación inicial de la siguiente manera: </td><td> Ninguna otra plataforma. </td></tr><tr><td> Prueba 1 </td><td> SO </td><td> S </td><td> W </td><td> N </td><td> N </td><td> E </td><td> N </td></tr><tr><td> Ensayo 2 </td><td> Noroeste </td><td> N </td><td> S </td><td> W </td><td> E </td><td> S </td><td></td></tr><tr><td> Prueba de 3 </td><td> NE </td><td> S </td><td> N </td><td> E </td><td> W </td><td> W </td><td></td></tr><tr><td> Ensayo 4 </td><td> Centro </td><td> E </td><td> E </td><td> W </td><td> S </td><td> E </td><td></td></tr><tr><td> Prueba de 5 </td><td> SE </td><td> W </td><td> S </td><td> S </td><td> N </td><td> N </td><td></td></tr></tbody></table> Tabla 1. Muestra de agua laberinto del protocolo * * Tenga en cuenta cómo tanto la posición de la plataforma y cambiar de dirección a partir del día 1, mientras que en los días 2-5 de la posición de la plataforma se mantiene constante, mientras que los cambios de dirección de partida. El día 6, no hay una plataforma y un único ensayo. La dirección de partida para el día 6 es el más alejado de la ubicación de la plataforma anterior (SW), de modo que los ratones tienen que viajar una cierta distancia antes de entrar en el cuadrante de la plataforma previamente aprendidas.

<ol><li>Morris, R. G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spatial+localization+does+not+require+the+presence+of+local+cues%5BTitle%5D)+AND+%22Learning+and+Motivation%22%5BJournal%5D)">Spatial localization does not require the presence of local cues.</a> Learning and Motivation. 12, 239-260 (1981).</li>
<li>O'Keefe, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+review+of+the+hippocampal+place+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Prog+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">A review of the hippocampal place cells.</a> Prog Neurobiol. 13, 419-439 (1979).</li>
<li>Scoville, W. B., Milner, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Loss+of+recent+memory+after+bilateral+hippocampal+lesions%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurol+Neurosurg+Psychiatry%22%5BJournal%5D)">Loss of recent memory after bilateral hippocampal lesions.</a> J Neurol Neurosurg Psychiatry. 20, 11-21 (1957).</li>
<li>Eichenbaum, H., Stewart, C., Morris, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hippocampal+representation+in+place+learning%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Hippocampal representation in place learning.</a> J Neurosci. 10, 3531-3542 (1990).</li>
<li>Block, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global+ischemia+and+behavioural+deficits%5BTitle%5D)+AND+%22Progress+in+Neurobiology%22%5BJournal%5D)">Global ischemia and behavioural deficits.</a> Progress in Neurobiology. 58, 279-295 (1999).</li>
<li>Qing, H., He, G., Ly, P. T., Fox, C. J., Staufenbiel, M., Cai, F., Zhang, Z., Wei, S., Sun, X., Chen, C. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Valproic+acid+inhibits+Abeta+production%2C+neuritic+plaque+formation%2C+and+behavioral+deficits+in+Alzheimer%27s+disease+mouse+models%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Med%22%5BJournal%5D)">Valproic acid inhibits Abeta production, neuritic plaque formation, and behavioral deficits in Alzheimer's disease mouse models.</a> J Exp Med. 205, 2781-2789 (2008).</li>
<li>Sun, X., He, G., Qing, H., Zhou, W., Dobie, F., Cai, F., Staufenbiel, M., Huang, L. E., Song, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hypoxia+facilitates+Alzheimer%27s+disease+pathogenesis+by+up-regulating+BACE1+gene+expression%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Hypoxia facilitates Alzheimer's disease pathogenesis by up-regulating BACE1 gene expression.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. , 18727-18732 (2006).</li>
<li>D'Hooge, R., De Deyn, P. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Applications+of+the+Morris+water+maze+in+the+study+of+learning+and+memory%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Research+Reviews%22%5BJournal%5D)">Applications of the Morris water maze in the study of learning and memory.</a> Brain Research Reviews. 36, 60-90 (2001).</li>
<li>Brandeis, R., Brandys, Y., Yehuda, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+use+of+the+Morris+Water+Maze+in+the+study+of+memory+and+learning%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">The use of the Morris Water Maze in the study of memory and learning.</a> Int J Neurosci. 48, 29-69 (1989).</li>
<li>Lipp, H. P., Wolfer, D. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetically+modified+mice+and+cognition%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">Genetically modified mice and cognition.</a> Curr Opin Neurobiol. 8, 272-280 (1998).</li>
<li>Sandi, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+and+mechanisms+of+action+of+glucocorticoid+involvement+in+memory+storage%5BTitle%5D)+AND+%22Neural+Plast%22%5BJournal%5D)">The role and mechanisms of action of glucocorticoid involvement in memory storage.</a> Neural Plast. 6, 41-52 (1998).</li>
</ol>

Todos los experimentos se realizaron de acuerdo con la Universidad británica de Atención Animal de Columbia y el empleo y las directrices CIHR.

Edad, sexo, especie, variedad y las diferencias influyen en el rendimiento MWM (8). Los estudios indican que los ratones de edad tienen un desempeño pobre en el MWM, mientras que los roedores machos se desempeñan mejor que las mujeres, además, flotante es más pronunciada en los ratones que las ratas (9, 10). Por lo tanto, estos elementos deben ser equiparados en todas las pruebas. La evidencia también sugiere que los animales estresados ​​tienen un rendimiento en el MWM (11), los factores ambientales que por lo tanto puede causar estrés, como la temperatura, la luz y el ruido, deben ser controlados y se mantiene constante durante la tarea.

<table border="1"><tbody><tr><th> Nombre del reactivo </th><th> Empresa </th><th> Comentarios (opcional) </th></tr><tr><td> Vídeo AnyMaze Sistema de Seguimiento </td><td> Empresa Stoelting </td><td></td></tr><tr><td> Pintura al temple </td><td> Reeves y Poole Grupos </td><td> Blanco, en polvo </td></tr></tbody></table>

agua morris laberinto de prueba para los déficits de aprendizaje y memoria en ratones de alzheimer modelo de enfermedad

Morris Water Maze Test for Learning and Memory Deficits in Alzheimer&#39;s Disease Model Mice

El laberinto acuático de Morris (MWM) se estableció por primera vez por el neurocientífico Richard G. Morris en 1981 para poner a prueba el aprendizaje dependiente del hipocampo, incluyendo la adquisición de memoryand espacial a largo plazo la memoria espacial 1. El MWM es un procedimiento relativamente simple que suele estar compuesta de seis días de prueba, la principal ventaja es la diferenciación entre el espacio (plataforma oculta) y no espaciales (visible de la plataforma) las condiciones de 4.2. Además, el entorno de prueba MWM reduce la interferencia olor ruta 5. Esto ha llevado a la tarea de ser utilizado ampliamente en el estudio de la neurobiología y neurofarmacología de aprendizaje espacial y la memoria. El MWM juega un papel importante en la validación de modelos de roedores para los trastornos neurocognitivos como la enfermedad de Alzheimer 6, 7. En este protocolo, se discutió el procedimiento típico de MWM para el aprendizaje y la memoria de las pruebas y análisis de datos de uso común en ratones la enfermedad de Alzheimer modelo transgénico.

El laberinto acuático de Morris es una tarea para poner a prueba el comportamiento dependiente del hipocampo aprendizaje y la memoria. Ha sido ampliamente utilizada en el estudio de la neurobiología, la neurofarmacología y trastornos neurocognitivos en modelos de roedores.

Agua Morris laberinto de prueba para los déficits de aprendizaje y memoria en ratones de Alzheimer modelo de enfermedad

El laberinto acuático de Morris (MWM) fue establecido inicialmente por el neurocientífico Richard G. Morris en 1981 con el fin de evaluar el aprendizaje dependiente del hipocampo, incluyendo...

El objetivo general del siguiente experimento consiste en evaluar el aprendizaje y la memoria dependientes del hipocampo. En el día uno, se entrena al ratón para que encuentre una plataforma elevada marcada con una bandera, colocada aleatoriamente en una piscina de agua transparente, con el fin de que el ratón aprenda que la tarea tiene un punto final escapable. Como segundo paso, en días posteriores se entrena al ratón colocándolo en una piscina de agua opaca desde distintas posiciones, mientras la plataforma permanece sumergida y fija en una ubicación determinada.Esto permite que el ratón aprenda la ubicación de la plataforma utilizando las señales del entorno. A continuación, se retira la plataforma en el último día y se rastrea el patrón de nado del ratón durante un minuto para evaluar la adquisición de la tarea. De esta manera, se obtienen los resultados sobre aprendizaje y memoria.Este muestra deterioros en el aprendizaje espacial y la memoria según las latencias de escape y la longitud del recorrido observadas en las tres condiciones de prueba diferentes. La principal ventaja de esta técnica frente a los métodos existentes es que es relativamente sencilla para diferenciar entre las condiciones de plataforma oculta especial y de plataforma visible no especial. Por lo general, las personas nuevas en este método pueden tener dificultades porque es sensible al manejo experimental.Debe asegurarse de que los ratones no experimenten estrés durante los procedimientos, ya que esto podría afectar los resultados. Esta técnica será demostrada por la señora Kelly Bromley y las estudiantes de posgrado de Suecia de mis laboratorios. Primero asegure una piscina circular. Si los ratones experimentales son negros, use una piscina blanca y si los ratones son blancos, use una piscina negra. Ahora.Organice la habitación con divisores de manera que los animales en prueba no vean al experimentador durante la sesión. Coloque indicadores espaciales de alto contraste alrededor de la habitación y en el interior de la piscina en una ubicación que quede por encima de la superficie del agua. Llene la piscina con agua y equilibre a la temperatura ambiente.Luego coloque una plataforma de 10 centímetros de diámetro en la piscina, un centímetro por encima de la superficie del agua, blanca para una piscina blanca o de plexiglás transparente para una piscina negra. Calibre la piscina en el software de la computadora para que la cámara pueda generar información de distancia física a partir de información basada en píxeles.Divida la piscina en cuatro cuadrantes. Especifique la zona de la plataforma como una zona variable, que puede cambiar en cada ensayo. Luego cree cinco subzonas de plataforma, una en cada cuadrante y una en el centro de la piscina.Guarde la calibración y utilícela durante los días de prueba restantes. A continuación, establezca el tiempo máximo de prueba en 60 segundos. Si el ratón encuentra la plataforma antes de este tiempo, programe el software para que detenga la prueba cuando se encuentre la plataforma.Asimismo, especifique el programa para comenzar el seguimiento automáticamente cuando el experimentador salga del área de prueba. Utilice cualquier opción de minimización de reflexiones que ofrezca el paquete de software. Finalmente, realice el seguimiento de la trayectoria, longitud, escape, latencia y tiempo empleado en cada cuadrante.El día de la prueba, traslade los ratones desde su instalación de alojamiento hasta la sala de comportamiento, en un área donde no puedan ver el estanque ni las referencias espaciales. Deje que se adapten al nuevo entorno durante al menos 30 minutos. Antes de comenzar la prueba, cargue la calibración del estanque en el software de seguimiento.Cree cinco ensayos con un programa adecuado de intervalo entre ensayos, variando la ubicación de la plataforma y la dirección de inicio en cada ensayo. Coloque una bandera sobre la plataforma para aumentar su visibilidad. Para comenzar la prueba, levante al ratón desde su jaula de origen por la base de la cola, sosteniendo al animal durante su traslado al área de prueba.Luego, coloque suavemente el ratón en el agua con la cabeza orientada hacia el borde de la piscina. Abandone rápidamente el área de prueba. Si el ratón encuentra la plataforma antes del límite de 62 segundos, permita que permanezca sobre la plataforma durante cinco segundos, y luego devuélvalo a su jaula de origen.Si el ratón no encuentra la plataforma, coloque al ratón sobre la plataforma y permita que permanezca allí durante 20 segundos antes de devolverlo a su jaula de origen. Repita el procedimiento con todos los ratones en el ensayo. Comience cada ensayo subsiguiente con una ubicación diferente de la plataforma y una dirección de partida distinta, según lo indique el software del programa.Una vez finalizadas las pruebas, devuelva los ratones a su instalación de alojamiento en preparación para el día siguiente. Retire la bandera de la plataforma y agregue agua adicional a la piscina para sumergir la plataforma un centímetro por debajo de la superficie. Cargue la calibración de la piscina en el software de seguimiento y cree cinco ensayos con un intervalo interensayo adecuado.Luego programe la ubicación de la plataforma para que permanezca en la misma posición durante todos los ensayos y días, pero que la dirección inicial varíe en cada ensayo de cada día. Para los ratones negros, agregue pintura blanca en polvo tempera no tóxica a la piscina y mezcle bien. Utilice suficiente pintura para que la plataforma sumergida no sea visible desde la superficie del agua.Proceda a probar individualmente a los ratones en el agua como se describió anteriormente para el ensayo de sonda final. Cargue la calibración de la piscina en el software de seguimiento. Cree un ensayo sin zona de plataforma y con una dirección de partida.Preferiblemente, la dirección inicial más alejada del cuadrante donde se colocó la plataforma los días dos a cinco. También configure la duración del recorrido en 60 segundos. Ahora retire la plataforma del estanque y evalúe a cada ratón individualmente en el agua como se describió anteriormente; para cada día y cada ratón, promedie las cinco pruebas para obtener una única longitud de trayectoria y una latencia de escape por sujeto de prueba.Además, analice e interprete los datos según se detalla en el manuscrito adjunto utilizando el laberinto acuático de Morris. Se evaluaron ratones transgénicos PP23 de siete meses que portaban el gen A PP humano con mutación sueca, después de un mes de inyecciones diarias de ácido valproico o solución vehicular, durante el primer día de pruebas con plataforma visible. Los ratones PP23 tratados con VPA y los controles exhibieron una latencia similar para escapar hacia la plataforma visible.Los ratones A PP 23 tratados con VPA y los controles tuvieron distancias de nado similares antes de escapar a la plataforma visible. En la prueba de plataforma visible y en las pruebas de plataforma oculta del tercer y cuarto día, los ratones A PP 23 tratados con VPA mostraron una latencia más corta para escapar a la plataforma oculta. El tercer y cuarto día, los ratones A PP 23 tratados con VPA tuvieron una longitud de nado más corta antes de escapar a la plataforma oculta.En la prueba de sonda del sexto día, en comparación con los ratones control, los ratones tratados con VPA y PP 23 recorrieron significativamente más veces el tercer cuadrante donde anteriormente se había colocado la plataforma oculta. Aunque es importante recordar, al intentar este procedimiento, controlar los factores ambientales que podrían causar estrés, como el ruido, la temperatura y la luz. Tras este procedimiento, se pueden realizar otros métodos, como el condicionamiento al miedo señalizado y contextual, para responder preguntas adicionales, como si los déficits de aprendizaje son específicos del hipocampo o si forman parte de un problema neurocognitivo más amplio, que podría incluir la amígdala.

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Investigación

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Neurociencia

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Disminuye la cuantificación cognitivos causados ​​por la radioterapia craneal

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El laberinto acuático con reubicación de plataformas: un método para evaluar la memoria de trabajo

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Morris Water Maze Prueba: Optimización de ratón Colar y entorno de pruebas

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Motor y del hipocampo aprendizaje espacial dependiente y Evaluación de referencia a memoria en un modelo de rata transgénica de la enfermedad de Alzheimer con accidente cerebrovascular

Aquí presentamos un protocolo para una prueba específica de ratón de la cognición que no requiere nadar. Esta prueba puede utilizarse para distinguir con éxito los ratones de lesión cerebral traumática inducida por impacto cortical controlado de los controles simulados.

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Aquí, se describe un protocolo para llevar a cabo las pruebas de laberinto de agua Morris para evaluar la capacidad de aprendizaje y memoria de los ratones modelo de la enfermedad de Alzheimer y para evaluar el efecto de la acupuntura manual para tratarlos.

Análisis de la capacidad de aprendizaje y memoria en un modelo de ratón de la enfermedad de Alzheimer usando el laberinto de agua Morris

Se presenta un método de bajo costo para diseñar y construir un cabezal de luz pre-amplificador del sistema de grabación simultánea neural y la capacidad de estimulación. Este dispositivo puede ser impermeabilizadas para su uso en animales que nadan.

Diseño y construcción de un cabezal rentable para la estimulación simultánea neural y de grabación en el laberinto de agua

Aprende a evaluar déficits de aprendizaje y memoria en modelos de Alzheimer mediante el laberinto de agua de Morris en ratones. Este método permite analizar la función hipocampal y los efectos de tratamientos farmacológicos.

Agua Morris laberinto de prueba para los déficits de aprendizaje y memoria en ratones de Alzheimer modelo de enfermedad

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