Name: Asistida por microondas diagnóstico rápido de enfermedades de virus de plantas por microscopía electrónica de transmisión (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-10-14T12:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 20 s
Description: Aprende a diagnosticar enfermedades virales en plantas mediante microscopía electrónica de transmisión asistida por microondas. Este método reduce el tiempo de preparación de muestras a unas dos horas, permitiendo un diagnóstico claro en medio día.

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Este trabajo fue apoyado por el Fondo Científico de Austria (FMF, P20619 y P22988 para BZ).

Microondas preparación de muestras asistida <ol><li> Antes del inicio de la preparación de muestras es necesario programar el procesador automático de tejidos de microondas para la microscopia electrónica (Leica EM AMW, Leica Microsystems, Viena, Austria) con los siguientes protocolos (Tabla 1) para la preparación de muestras asistida por microondas para TEM: <img src="/files/ftp_upload/2950/2950table1.jpg" alt="Tabla 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Tabla 1"> Tabla 1. Protocolo para la preparación de la muestra mediante la irradiación de microondas. Las distintas columnas muestran (de izquierda a derecha): <ol><li> Número Vial (nr Vial.) Representa el orden en que se carga el vial en el carrusel del procesador. </li><li> Paso del proceso actual. </li><li> Reactivos en los viales. </li><li> Duración de la etapa actual. </li><li> La temperatura máxima que se alcanza en el vial antes de la irradiación de microondas se apaga. </li><li> Establecimiento de la irradiación de microondas: aumento continuo = bruscos de temperatura, manteniendo la temperatura; Pendiente = aumento de la temperatura suave, la temperatura final alcanzada al final; pulsada = aumento rápido de la temperatura, la energía apagado hasta que la temperatura bajó 5 ° C, el poder reanudó alcance la temperatura . </li><li> La potencia máxima de la irradiación de microondas. </li></ol></li><li> Recién preparar las soluciones para las diversas fases descritas en el protocolo de preparación de la muestra (por resina epoxi Agar 100 ver 1.7), llenarlos en los viales designados de acuerdo con el protocolo programado (Tabla 1), la carga de los viales en el carrusel, a continuación, insertar el carrusel en el procesador de tejidos de microondas, y, finalmente, la carga de la primera copa en la cámara de mono-modo. </li><li> Cortar secciones pequeñas de las hojas (1mm 2) de Nicotiana tabacum infectadas con el Virus del mosaico del tabaco (TMV), con una hoja de afeitar en una placa de cera de modelar en una caída de 3% de glutaraldehído (Agar Scientific Ltd., Stansted, Inglaterra) en 60 mM Sørensen tampón fosfato (pH 7,2) a temperatura ambiente. </li><li> La transferencia de las secciones con pinzas finas de inmediato en las cestas designadas con una abertura de malla de aproximadamente 200μm. Pila de las canastas en la parte superior de cada uno y los inserta en la cámara de mono-modo. Se debe tener cuidado de que las muestras se cubren constantemente con solución fijadora durante la carga y el apilamiento de las canastas para que no se sequen. </li><li> Inicie el microondas previamente programada la asistencia de protocolo de preparación de muestras para la fijación, deshidratación e infiltración. </li><li> Mientras que la preparación de muestras se realiza automáticamente por el procesador de tejido microondas continuar con tinción negativa con el material vegetal restante como se describe en la sección 3 (tinción negativa). </li><li> Recién preparar Agar 100 resina epoxi mediante la mezcla de los componentes que se exponen: Agar llenar 24g 100, 16 g de anhídrido succínico dodecenil, y 10 g de anhídrido metil nadic (para todos los componentes ver Agar Scientific Ltd., Stansted, Inglaterra) en un vaso de plástico de calor a 40 ° C y mezclar bien. Añadir 1,2 g de bencil dimetilamina y mezclar bien. Rellene Agar 100 resina epoxi en la polimerización designado se forma justo antes de que el protocolo de preparación de la muestra llega a su fin (por ejemplo, durante el paso 22 en la tabla 1). </li><li> Después de que el protocolo está terminado (después del paso 22 en la tabla 1) la liberación de las cestas apiladas que contienen las muestras se infiltraron desde la cámara de mono-modo en el último frasco de carrusel. Retire el carrusel desde el dispositivo de microondas, desapilar las cestas y cargarlos usando pinzas finas en las formas de polimerización designado. Se debe tener cuidado de que las muestras están siempre cubiertos de resina epoxi Agar 100 durante desapilado y la carga para que no se sequen. </li><li> Pila de las formas de polimerización en la parte superior de cada uno. Se debe tener cuidado de que las muestras están siempre cubiertos de resina epoxi Agar 100 durante el apilado y carga de manera que no se sequen. </li><li> Eliminar los viales utilizados anteriormente en el carrusel del procesador de tejidos de microondas, que carga con las cestas apiladas e insertar en el carrusel en el procesador de tejidos de microondas. </li><li> Iniciar el protocolo de polimerización previamente programada (tabla 1). </li><li> Mientras que la polimerización se lleva a cabo automáticamente por el procesador de tejidos microondas, examinar las redes de tinción negativa con un microscopio electrónico de transmisión [por ejemplo, Philips CM10 TEM, FEI (anteriormente Philips), Eindhoven, Países Bajos] y llevar a cabo el análisis de imágenes como se describe en la sección 3 y 4 ( tinción negativa y análisis de imágenes). </li><li> Después de que el protocolo está terminado eliminar las formas de polimerización de la cámara de mono-modo, desapilar las formas de polimerización y eliminar los bloques polimerizados que contienen las muestras. Ahora están listos para ser seccionados con un microtomo. </li></ol> 2. Corte y seccionamiento <ol><li> Introduzca uno o más bloques en los titulares de la muestra por separado para el corte ultra fino con la muestra en quedarse encima de 1 cm del soporte. </li><li>Recorte el bloque con un condensador de ajuste muestra para TEM (por ejemplo, Leica Reichert Ultratrim, Leica Microsystems), de modo que una cara del bloque de máx. 1 mm de longitud y 200μm de espesor que contiene material de la hoja tanto como sea posible se logra (tamaño de bloque cara podría ser necesario ajustar el tamaño de la cuchilla de diamante). </li><li> Sección del bloque con un ultramicrótomo (por ejemplo, Reichert Leica Ultracut S, Leica Microsystems) mediante el uso de un cuchillo de diamante en un ángulo de cuchilla de 45 º (por ejemplo, Diatome Ultra 45, Gröpl, Tulln, Austria). Espesor de la sección debe ser ajustado a alrededor de 70 a 90 nm y la velocidad de corte debe estar alrededor de 1 mm / s. Recoger varias secciones con una formvar (Agar Scientific Ltd.) recubierto de cobre o níquel 200 rejilla de malla cuadrada. </li><li> Después de la tinción de las secciones de la parrilla con citrato de plomo (Agar Scientific Ltd., citrato de plomo 1,1 g disueltos en 42 ml de agua doblemente destilada y 8 ml de NaOH 1N) durante 5 minutos en una placa de petri parcialmente lleno con NaOH para crear un CO 2 sin medio ambiente y durante 15 minutos con acetato de uranilo al 1% (Agar Scientific Ltd.) disuelto en agua destilada a temperatura ambiente. Lave las rejillas con agua destilada durante 1 minuto entre cada paso después de la tinción. Deje secar al aire de las rejillas en una celda de la malla. </li><li> Examinar las secciones con un microscopio electrónico de transmisión (por ejemplo, Philips CM10 TEM, FEI, Eindhoven, Holanda). </li></ol> 3. Tinción negativa <ol><li> Cosecha de aproximadamente 100 mg de material de las hojas infectadas con TMV y preparar la savia bruta por homogeneizar el material por 2 minutos con una hoja de afeitar en un portaobjetos en 100μl de 60 mm Søfrensen (pH 7,2). </li><li> Transferencia de 20μl del homogeneizado resultante en el primer pozo de un portaobjetos de microscopio recubierto de teflón, con 4 o más pozos (como alternativa también es posible transferir el homogeneizado en un trozo de parafina). </li><li> Coloque una rejilla Formvar recubierto en la parte superior de la homogeneizado con el formvar (Agar Scientific Ltd.) cara revestida mirando hacia la baja y se incuba durante 5 minutos. </li><li> Lave la red 2 veces durante 2 minutos cada uno mediante la colocación de la rejilla en la parte superior de dos gotas de 200μl Sørensen 60 mM (pH 7,2). </li><li> Incubar la red durante 1 minuto con una solución recién preparada de ácido fosfotúngstico al 2% (Agar Scientific Ltd.) en una solución 60 mM Sørensen (pH 6,5). </li><li> Retire la rejilla y deje que se seque al aire en una celda de la malla. </li><li> Examinar la red con un microscopio electrónico de transmisión (por ejemplo, Philips CM10 TEM, FEI, Eindhoven, Holanda). Tomar por lo menos 10 imágenes elegidas al azar de viriones con tinción negativa (por lo menos 10 o más viriones debe ser visible en cada imagen) con el microscopio electrónico de transmisión con un aumento de 21000X primaria o superior. Se debe tener cuidado de que todas las imágenes tienen el mismo aumento. </li></ol> 4. De análisis de imagen <ol><li> Medir la longitud y la anchura de al menos 100 elegidas al azar partículas del virus solo en las micrografías tomadas de las muestras con tinción negativa mediante el uso de cualquier análisis de imágenes de software [por ejemplo, células D (Olympus, la Vida y la Ciencia de los Materiales Europe GmbH, Hamburgo, Alemania) con el herramienta de análisis de partículas o Optimas 6.5.1 (Media Cybernetics Inc., de Bethesda, Maryland, EE.UU.)]. </li><li> Calcular medias y desviaciones estándar para lograr una longitud y anchura media de las partículas del virus visualizado por los métodos de tinción negativa y TEM. </li><li> Compare las características de longitud y ultraestructurales (obtenido en 2.5) con un tamaño de los virus y las alteraciones ultraestructurales inducidas por virus de las enfermedades conocidas en la literatura con el fin de identificar claramente las enfermedades causadas por virus. </li></ol> 5. Los resultados representativos: Después de la preparación de muestras asistida por microondas típico TMV inducida por alteraciones ultraestructurales, tales como grandes áreas que contienen viriones alineados en forma paralela se puede observar con el microscopio electrónico de transmisión en el citosol de las células infectadas por Nicotiana tabacum (Fig. 1A). Además, en la savia bruta de TMV hojas infectadas partículas de TMV se pudo observar como flexuoso, en forma de barra estructuras después de la tinción negativa (Fig. 1B). Análisis de imágenes de 100 partículas de virus reveló un tamaño promedio de TMV de 280 nm de longitud y 17nm de ancho (Fig. 2). La ultraestructura de las células infectadas con TMV y el tamaño de los viriones observada en este estudio se encontró que de acuerdo con TMV inducida por las propiedades ultraestructurales en el tabaco y el rango de tamaño de partículas de TMV previamente reportados en la literatura 9-15. <img src="/files/ftp_upload/2950/2950fig1.jpg" alt="Figura 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 1"> Figura 1. Micrografías electrónicas de transmisión de las células de la hoja de TMV-infectados y los viriones. A) La imagen muestra la ultraestructura de las células infectadas con TMV mesófilo de la hoja de Nicotiana tabacum después de la preparación de muestras asistida por microondas de la planta. Tenga en cuenta la gran superficie de los viriones paralelos alineados que se acumuló en el citosol.C = cloroplastos con almidón (St), M = mitocondria, N = núcleo, V = vacuola, Bar = 2μm. B) La imagen muestra los viriones que fueron detectados por tinción negativa en la savia de las hojas infectadas. <img src="/files/ftp_upload/2950/2950fig2.jpg" alt="Figura 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 2"> Figura 2. Tamaño relativo de los viriones. Distribución relativa de la longitud y la anchura de TMV-partículas después de la tinción negativa de la savia de las hojas infectadas, ya que apareció en el microscopio electrónico. Los valores medios (media longitud / anchura media ± desviación estándar) se calcula a partir de 100 viriones.

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</ol>

No hay conflictos de interés declarado.

Asistida por microondas de preparación de muestras de plantas para TEM se ha demostrado que la oferta de datos ultraestructurales rápido y fiable a las pocas horas 3,4,16. La preservación fina estructural de las membranas de los organelos y logra con el método utilizado en este estudio fue similar a las muestras convencionales y cryofixed 5,15 con la ventaja de una reducción masiva en la fijación de la muestra y la incrustación de tiempo de 3 días o más a cerca de 2 horas. Esto representa el protocolo de muestreo más rápido de preparación para TEM actualmente disponibles en la literatura. El método descrito en este estudio combinado asistida por microondas de preparación de muestras de plantas para TEM con los métodos de tinción negativa, que permite una identificación clara y rápida de la TMV inducida por alteraciones ultraestructurales y el agente viral en sí. TMV alteraciones inducidas ultraestructurales podría ser investigado después de la poda, corte y post-tinción en aproximadamente 4 horas después del inicio de la fijación en el microscopio electrónico de transmisión. Usando el modo totalmente automático la preparación de muestras liberó a los investigadores para llevar a cabo la tinción negativa en el ínterin con el fin de determinar el tamaño y el ancho del agente viral. Por lo tanto, podemos concluir que este método permite un diagnóstico claro y rápido de las enfermedades de virus de la planta en alrededor de medio día, que es de gran importancia para su futuro uso en experimentos científicos en la agricultura y la planta de fitopatología. Como este método también podría utilizarse para el diagnóstico rápido de enfermedades de los animales y humanos que tiene un gran potencial para su futura aplicación en medicina y patología veterinaria.

<table><tbody><tr><td>Glutaraldehído</td><td>Agar Scientific</td><td>R1312</td><td></td></tr><tr><td>Óxido de osmio</td><td>Agar Scientific</td><td>R1022</td><td></td></tr><tr><td>Resina Agar 100</td><td>Agar Scientific</td><td>R1043</td><td></td></tr><tr><td>Anhídrido dodecenilsuccínico</td><td>Agar Scientific</td><td>R1051</td><td></td></tr><tr><td>Anhídrido metilnádico</td><td>Agar Scientific</td><td>R1081</td><td></td></tr><tr><td>Bencil dimetilamina</td><td>Agar Scientific</td><td>R1060</td><td></td></tr><tr><td>Citrato de plomo</td><td>Agar Scientific</td><td>R1210</td><td></td></tr><tr><td>Acetato de uranilo</td><td>Agar Scientific</td><td>R1260A</td><td></td></tr><tr><td>Ácido fosfotúngstico</td><td>Agar Scientific</td><td>R1213</td><td></td></tr><tr><td>Formvar</td><td>Agar Scientific</td><td>R1202</td><td></td></tr><tr><td>Leica EM AMW</td><td>Leica Microsystems</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Leica (Reichert) Ultratrim</td><td>Leica Microsystems</td><td></td><td>Hay disponible un modelo más reciente</td></tr><tr><td>Leica (Reichert) Ultracut S</td><td>Leica Microsystems</td><td></td><td>Hay disponible un modelo más reciente</td></tr><tr><td>Diatome Ultra 45</td><td>Gr&amp;#246;pl</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Philips CM10 TEM</td><td>FEI</td><td></td><td>Hay disponible un modelo más reciente</td></tr><tr><td>Cell D</td><td>Olympus Corporation</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Optimas 6.5.1</td><td>Media Cybernetics Inc.</td><td></td><td>Hay disponible una versión más reciente</td></tr></tbody></table>

asistida por microondas diagnóstico rápido de enfermedades de virus de plantas por microscopía electrónica de transmisión

Microwave Assisted Rapid Diagnosis of Plant Virus Diseases by Transmission Electron Microscopy

Las investigaciones de los cambios ultraestructurales inducidas por virus son a menudo necesarios para identificar claramente las enfermedades virales en las plantas. Con la preparación de muestras convencionales de microscopía electrónica de transmisión (TEM) estas investigaciones pueden durar varios días 1,2 y por tanto no adecuada para un diagnóstico rápido de enfermedades virales de las plantas. La fijación de microondas se pueden utilizar para reducir drásticamente el tiempo de preparación de muestras para las investigaciones de TEM con similares resultados ultraestructurales observados después de la preparación de muestras convencional 3-5. Diferentes dispositivos de microondas por encargo están disponibles que pueden ser utilizados para la fijación de éxito y la inclusión de muestras biológicas para investigación TEM 5-8. En este estudio hemos demostrado sobre el virus del mosaico del tabaco (TMV) las plantas infectadas con Nicotiana tabacum que es posible diagnosticar alteraciones ultraestructurales en las hojas en la mitad de una semana a través de la preparación de muestras asistida por microondas TEM. Hemos elegido para llevar a cabo este estudio con un dispositivo de microondas disponibles en el mercado, ya que lleva a cabo la preparación de muestras casi en su totalidad de forma automática 5 a diferencia de los otros dispositivos disponibles en muchos pasos todavía tiene que realizarse de forma manual 6.8 y por lo tanto más tiempo y mucho trabajo. Como preparación de la muestra se realiza de forma totalmente automática tinción negativa de las partículas virales en la savia de los restantes TMV hojas infectadas y el siguiente examen de la ultraestructura y el tamaño se puede realizar durante la fijación e inclusión.

Este estudio describe un método que permite el diagnóstico rápido y libre de enfermedades virales en las plantas cerca de la mitad de un día mediante el uso de una combinación de preparación de muestras asistida por microondas para la planta de microscopía electrónica de transmisión y los métodos de tinción negativa.

Asistida por microondas diagnóstico rápido de enfermedades de virus de plantas por microscopía electrónica de transmisión

Las investigaciones de los cambios ultraestructurales inducidos por los virus suelen ser necesarias para identificar claramente las enfermedades víricas en las plantas. Con el muestreo convencional...

El objetivo general de este procedimiento es diagnosticar enfermedades virales en plantas en cuestión de horas mediante microscopía electrónica de transmisión. Este procedimiento comienza con la fijación y inclusión asistidas por microondas del material vegetal infectado. El siguiente paso consiste en extraer y contrastar las partículas virales a partir de las muestras vegetales mediante tinción negativa, seguido del corte de las muestras vegetales incluidas.Las muestras se analizan luego en el microscopio electrónico de transmisión y el tamaño de las partículas virales se mide mediante análisis de imagen. En última instancia, los resultados muestran alteraciones ultraestructurales típicas inducidas por el virus y el tamaño de las partículas virales mediante métodos de microscopía electrónica de transmisión. La principal ventaja de esta técnica frente a los métodos existentes, como la fijación y inclusión convencionales a temperatura ambiente, que pueden tardar varios días, es que el tiempo de preparación de muestras para la microscopía electrónica de transmisión se puede reducir a unas dos horas, permitiendo así un diagnóstico claro de la enfermedad viral en aproximadamente medio día.Realizando este procedimiento junto conmigo estará Gerhard Kaba, un técnico, y el profesor Zelnik, un colega de nuestro laboratorio. Antes del inicio del programa de preparación de muestras, el procesador de tejidos por microondas automático para microscopía electrónica LA A-E-M-A-M-W con los protocolos apropiados. Prepare las soluciones para los diferentes pasos descritos en el protocolo programado para fijación, deshidratación e infiltración, y colóquelas en los viales designados según el protocolo; cargue los viales en el carrusel. Inserte el carrusel en el procesador de tejidos por microondas y luego cargue el primer vial en la cámara de modo mono.A continuación, corte pequeñas secciones de hojas de tabaco *Nicotiana* infectadas con el virus del mosaico del tabaco, o TMV, utilizando una cuchilla de afeitar sobre una placa de cera para modelar, en una gota de glutaraldehído en tampón fosfato Sorensen a temperatura ambiente. Durante la recolección de las muestras y su carga en las cestas, es importante asegurarse de que siempre estén cubiertas con solución fijadora para que no se sequen. Con pinzas finas, transfiera inmediatamente las secciones a las cestas designadas con una anchura de malla de aproximadamente 200 micrómetros.Apile las cestas una encima de la otra e insértelas en la cámara de modo mono. Inicie el protocolo previamente programado de preparación de muestras asistido por microondas para la fijación, deshidratación e infiltración. Justo antes de que finalice el protocolo de preparación de muestras, llene con resina epoxi agar 100 recién preparada los moldes designados para la polimerización.Una vez finalizado el protocolo, retire las cestas apiladas que contienen las muestras infiltradas de la cámara de modo mono y colóquelas en el último vial del carrusel. Retire el carrusel del dispositivo de microondas y saque el vial que contiene las muestras del carrusel. A continuación, retire las cestas del vial y desápelas usando pinzas finas.Cargue las muestras en las formas designadas de polimerización. A continuación, apile las formas de polimerización una encima de la otra y retire los viales previamente utilizados del carrusel del procesador de tejidos por microondas. Cargue el carrusel con las cestas apiladas e inserte el carrusel en el dispositivo de microondas.Ahora inicie el protocolo de polimerización programado previamente. Una vez finalizado el protocolo, retire las formas de polimerización de la cámara de modo mono y sepárelas. Retire los bloques polimerizados que contienen las muestras, los cuales ya están listos para ser seccionados con un microtomo para comenzar el procedimiento de seccionado de los bloques que contienen las muestras.Inserte uno o más bloques en portaobjetos separados para corte ultrafino. Con la muestra hacia arriba, sobresaliendo aproximadamente un centímetro del portaobjetos. Afile el bloque con un cortador de muestras para MET de modo que se obtenga una cara del bloque con una longitud máxima de un milímetro y un ancho de 200 micrómetros, conteniendo la mayor cantidad posible de material foliar.Configure el ultramicrotomo para cortar secciones de aproximadamente 70 a 90 nanómetros de grosor a una velocidad de corte de alrededor de un milímetro por segundo. Seccione el bloque utilizando un cuchillo de diamante con un ángulo del cuchillo de 45 grados. Recoga múltiples secciones con una rejilla cuadrada de cobre o níquel recubierta con VAR de 200 mallas, y tiña las secciones sobre la rejilla con citrato de plomo durante cinco minutos en una placa de Petri parcialmente llenada con NAOH para crear un ambiente libre de CO2.Lave las rejillas con agua destilada durante un minuto. Finalmente, contratiña durante 15 minutos con ácido acético al 1% disuelto en agua destilada a temperatura ambiente después de lavar las rejillas con agua destilada durante un minuto, y seque al aire en una caja para rejillas. La tinción negativa del material vegetal restante se lleva a cabo mientras la preparación de la muestra es realizada automáticamente por el procesador de tejidos de microondas.Primero, recolecte aproximadamente 100 miligramos de material foliar infectado con TMV y prepare un extracto crudo SAP homogeneizando el material durante dos minutos con una hoja de bisturí sobre un microscopio. Deslice en buffer fosfato de sorenson y transfiera 20 microlitros del homogeneizado resultante al primer pocillo de un microscopio recubierto con teflón.Deslice con cuatro o más pocillos. Luego coloque una rejilla recubierta con formvar encima del homogenato, con el lado recubierto con formvar orientado hacia la gota, e incube durante cinco minutos. Lave la rejilla durante dos minutos colocándola encima de una gota de tampón fosfato-salino.Repita el lavado durante otros dos minutos. A continuación, incube la rejilla durante un minuto con una solución recién preparada de ácido fosfoestireno. Después de un minuto, retire la rejilla y déjela secar al aire.En una caja de rejillas, coloque la rejilla teñida negativamente en el portamuestras y examínela con un microscopio electrónico de transmisión. Mientras la polimerización se lleva a cabo automáticamente mediante el procesador de tejidos por microondas, obtenga al menos 10 imágenes de iones teñidos negativamente seleccionados al azar. En cada imagen debe observarse al menos 10 iones o más.Con el microscopio electrónico de transmisión a un aumento primario de 21.000 x o superior, es necesario tener cuidado de que todas las imágenes tengan el mismo aumento. Las secciones que contienen las muestras de tejido procesadas automáticamente por el procesador de tejidos por microondas también se examinan con un microscopio electrónico de transmisión. El análisis de las imágenes obtenidas mediante MET puede realizarse utilizando cualquier software de análisis de imágenes.Software informático con una herramienta de análisis de partículas. Mida la longitud y el tamaño de al menos 100 partículas virales individuales elegidas al azar en las micrografías obtenidas de las muestras teñidas negativamente. Calcule las medias y las desviaciones estándar para obtener una longitud y anchura promedio de las partículas virales visualizadas mediante métodos de tinción negativa y microscopía electrónica de transmisión (TEM) tras la preparación de muestras asistida por microondas.Alteraciones ultraestructurales típicas inducidas por el TMV, como grandes áreas que contienen iones alineados en forma paralela, pueden observarse mediante microscopía electrónica de transmisión en el citosol de células de tabaco *Nicotiana* infectadas. En esta micrografía electrónica de transmisión, C representa el cloroplasto con almidón, St.M representa la mitocondria, N representa el núcleo y V representa la vacuola.Además, en el extracto crudo de hojas infectadas por TMV, las partículas de TMV pudieron observarse como estructuras alargadas en forma de varilla después de la tinción negativa. Figura uno B. Este gráfico muestra la distribución relativa de la longitud y el ancho de 100 partículas de TMV tal como aparecieron en el microscopio electrónico. Tras la tinción negativa, el análisis de imágenes del extracto de hojas infectadas reveló un tamaño promedio para TMV de 280 nanómetros de longitud y 17 nanómetros de ancho tras su desarrollo para el diagnóstico rápido de enfermedades virales del cerebro.Esta técnica podría allanar el camino para que los investigadores en los campos de la patología animal y humana diagnostiquen rápidamente enfermedades animales y humanas mediante microscopía electrónica de transmisión.

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Immunology and Infection

Inmunología e Infección

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