Preparación de organoides a partir de tumores: un modelo tumoral in vitro en 3D

Pica el tejido tumoral en trozos pequeños. Transfiera las piezas a un tubo con tampón de digestión. Las fibras de colágeno que rodean las células se descomponen, degradando la matriz del tejido. Luego, peletice las piezas digeridas y deseche la mayor parte del tampón de digestión. Mueve el tubo para romper el gránulo.

La solución ahora consiste en grupos celulares de varios tamaños. Vuelva a suspender los grupos celulares en una solución de tripsina y un inhibidor de ROCK. La tripsina continúa descomponiendo el tumor y el inhibidor previene la muerte celular. A intervalos regulares, pipetee la solución para romper los grumos y dispersar las células. Luego, resuspende las células en una solución de matriz a la concentración adecuada.

Coloque gotas de la solución en una placa de cultivo para formar cúpulas de matriz. Coloque las placas boca abajo en una incubadora y deje que la matriz se solidifique por completo. Luego, agregue medios de cultivo celular e incube, con el lado derecho hacia arriba. La matriz proporciona un andamio para apoyar el crecimiento tridimensional del organoide.

Después de picar, coloque los trozos tumorales en un tubo de 15 mililitros de tampón de digestión pa