Preparación de organoides a partir de tumores: un modelo tumoral in vitro en 3D

Pica el tejido tumoral en trozos pequeños. Transfiera las piezas a un tubo con tampón de digestión. Las fibras de colágeno que rodean las células se descomponen, degradando la matriz del tejido. Luego, peletice las piezas digeridas y deseche la mayor parte del tampón de digestión. Mueve el tubo para romper el gránulo.

La solución ahora consiste en grupos celulares de varios tamaños. Vuelva a suspender los grupos celulares en una solución de tripsina y un inhibidor de ROCK. La tripsina continúa descomponiendo el tumor y el inhibidor previene la muerte celular. A intervalos regulares, pipetee la solución para romper los grumos y dispersar las células. Luego, resuspende las células en una solución de matriz a la concentración adecuada.

Coloque gotas de la solución en una placa de cultivo para formar cúpulas de matriz. Coloque las placas boca abajo en una incubadora y deje que la matriz se solidifique por completo. Luego, agregue medios de cultivo celular e incube, con el lado derecho hacia arriba. La matriz proporciona un andamio para apoyar el crecimiento tridimensional del organoide.

Después de picar, coloque los trozos tumorales en un tubo de 15 mililitros de tampón de digestión para una digestión de 1,5 a 2 horas a 37 grados Celsius. Al final de la digestión, sedimentar el tejido digerido por centrifugación y desechar el sobrenadante.

Mueva el tubo para aflojar el gránulo celular. Vuelva a suspender las células en 1 mililitro de tripsina precalentada suplementada con 10 inhibidores micromolares de Y-27632 ROCK durante 5 minutos a 37 grados centígrados.

Al final de la incubación, triture la lechada de tejido cinco veces con la punta de pipeta P1000 estándar. Regrese el tubo al baño de agua para una incubación y trituración adicionales de 5 minutos.

Para el recubrimiento de la cúpula de la matriz, lave las células digeridas en 9 mililitros de medio frío y luego recoja las células por centrifugación. Vuelva a suspender las células en 1 mililitro de medio fresco para contarlas y, después de contarlas, recoja las células por centrifugación una vez más. Diluir las células tumorales en el volumen apropiado de matriz.

Deje caer con cuidado 200 microlitros de solución de celda de matriz en cada pocillo de una placa de 6 pocillos calentada a 55 grados Celsius. Deje que las cúpulas se solidifiquen a temperatura ambiente durante 2 minutos antes de colocar la placa boca abajo en una incubadora a 37 grados centígrados durante 20 minutos.

Cuando las cúpulas se hayan solidificado por completo, agregue 2 mililitros de medio organoide prostático suplementado con andrógeno R1881 e inhibidor de ROCK a cada pocillo. Regrese la placa a la incubadora de cultivos celulares.

• In vitro tumor models - Methods for studying tumor behavior in lab-controlled conditions.
• PeproTech Noggin - A protein used to regulate cellular processes in tissue culture.
• Tumor model - A method or process used to replicate tumor environment and behavior for scientific studies.
• Cell pellet - Cluster of cells collected at the bottom of a tube after centrifugation.
• ROCK inhibitor organoids - Compounds that prevent cell apoptosis during organoid creation.
• Noggin conditioned media - Media enriched with Noggin protein, used in cellular culture and experiments.
• Cell pellet in tube - Term refers to cells that have been concentrated by centrifugation in a sample tube.

• Introduce In vitro tumor models by defining this as a replicate of tumor behavior (e.g., in vitro tumor models).
• Key Concepts by summarizing principles involved in cell pellet creation (e.g., cell pellet).
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• Practical Applications - Tumor models help study cancer growth and potential cures (e.g., in vitro tumor models).
• Industry Impact - Lab studies benefit the healthcare industry and the field of oncology (e.g., ROCK inhibitor organoids).
• Societal Importance - The research contributes to advancements in cancer treatment options (e.g., Noggin conditioned media).
• Link to Scientific Advancements - Understanding tumor behavior facilitates innovative treatment approaches.