Enriquecimiento de fosfopéptidos a base de dióxido de titanio: un método para el aislamiento selectivo de fosfopéptidos de la biblioteca de péptidos

Los fosfopéptidos son cadenas cortas de aminoácidos que contienen residuos de serina, treonina o tirosina fosforilada. Para aislar los fosfopéptidos de una mezcla de péptidos, comience tomando perlas de dióxido de titanio en un tubo. Equilibre para acondicionar las perlas utilizando un tampón aglutinante acidificado adecuado que contenga un agente de enfriamiento. Agregue la concentración deseada de mezcla de péptidos a la suspensión de perlas.

Incube la mezcla agitando continuamente para evitar que las perlas se asienten. La condición ácida promueve que el grupo fosfato de los fosfopéptidos forme enlaces coordinados con las perlas de titanio. El agente de enfriamiento en el tampón reduce cualquier unión inespecífica de péptidos no fosforilados a las perlas, dejándolos en suspensión.

Centrifugar para peletizar las perlas unidas a fosfopéptidos, mientras que los péptidos no fosforilados permanecen en el sobrenadante. Deseche el sobrenadante. Transfiera las perlas unidas a fosfopéptidos a una columna de filtro giratorio preensamblada. Centrifugar para eliminar el tampón de unión y atrapar las perlas conjugadas con fosfopéptido.

Transfiera el filtro a un tubo limpio y agregue una solu