Tinción negativa de exosomas purificados: un procedimiento para visualizar la morfología de los exosomas mediante microscopía electrónica de transmisión

Para realizar la tinción negativa de exosomas (vesículas esféricas de tamaño nanométrico), comience tomando una rejilla de microscopía electrónica adecuada. Prepara la rejilla con un descargador de brillo. Este proceso hace que la superficie de la rejilla sea hidrófila para una mejor adhesión de las muestras.

Simultáneamente, tome una suspensión de exosomas purificados en un tubo. Complemente el tubo con paraformaldehído, un fijador de muestras, e incube. El paraformaldehído penetra en los exosomas y reticula las proteínas y los ácidos nucleicos. Este paso es vital para preservar la morfología de los exosomas.

Ahora, cargue la suspensión del exosoma en la rejilla preparada previamente e incube para permitir que se produzca la adsorción. A continuación, agregue unas gotas de acetato de uranilo, una mancha de metal pesado, sobre la rejilla. Los iones de uranilo se unen a las proteínas y lípidos de la membrana, formando un depósito alrededor del límite del exosoma.

Por último, lave la rejilla con agua para eliminar el exceso de mancha. Deje que la rejilla se seque y obtenga imágenes con microscopía electrónica de transmisión o TEM.

Cuando un haz de electrones golpea los exosomas, la m