Modelo de células madre de glioma marcadas con luciferasa: un método mediado por lentivirus para preparar células madre de glioma marcadas con luciferasa para estudios terapéuticos in vitro

Las células madre del glioma o GSC son una subpoblación de glioma, un cáncer de células gliales en el cerebro.

El etiquetado de estas GSC con enzimas bioluminiscentes como la luciferasa ayuda a establecer ensayos de imágenes de alto rendimiento para la detección de fármacos.

Para preparar las GSC marcadas con luciferasa, comience con un cultivo de GSC en un medio de crecimiento adecuado.

Centrifugar el cultivo para obtener un sedimento celular y eliminar el sobrenadante.

Agregue enzimas digestivas adecuadas al gránulo. Estas enzimas disocian los grupos celulares y degradan cualquier rastro de tejido conectivo para obtener una suspensión unicelular.

Ahora, centrifuga la suspensión unicelular y retira el sobrenadante. Vuelva a suspender el gránulo en un medio fresco.

A continuación, siembre la concentración deseada de células en una placa de cultivo.

Incube el cultivo y deje que las células se adhieran a la placa de cultivo.

Posteriormente, agregue el título deseado de una construcción de gen que contenga virus para la proteína fluorescente verde mejorada con luciferasa o EGFP e incube.

El virus interactúa con los receptores de superficie de las GSC, desencadenando la liberación de ARN viral que contiene luciferasa-EGFP. Las enzimas celulares catalizan la transcripción inversa del ARN al ADN bicatenario y lo integran en el genoma de las GSC.

Cuando se visualizan bajo un microscopio de fluorescencia, las células que expresan luciferasa aparecen en verde debido a la fluorescencia emitida por EGFP.

Comience recolectando las células madre de glioma o GSC del medio de cultivo y centrifugándolas a 70 x g durante 3 minutos a temperatura ambiente. Después de eliminar el sobrenadante, digiera las células con accutasa durante 4 minutos a 37 grados centígrados.

Con una punta de 200 microlitros, pipetee las células repetidamente para disociar y volver a suspender el sedimento celular. Agregue las GSC a una densidad de 200,000 células en 1 mililitro de medio de cultivo en cada pocillo de una placa de cultivo de 12 pocillos e incube durante la noche.

Al día siguiente, agregue 30 microlitros de sobrenadante del virus luciferasa-EGFP en cada pocillo de la placa. Centrifugar las células a 1.000 x g durante 2 horas a 25 grados centígrados e incubarlas durante la noche.

Al día siguiente, reemplace el medio en los pocillos recolectando las GSC, centrifugándolas, eliminando el sobrenadante, resuspendiéndolas en medio nuevo y volviéndolas a cubrir. Cultive las células durante otras 48 horas.

Observe la placa bajo un microscopio fluorescente y confirme la aparición de células positivas para GFP.

• Glioma Stem Cells (GSCs) - Cancerous subpopulation of glial cells in the brain.
• Luciferase Cells - Cells tagged with the bioluminescent enzyme, luciferase.
• Glial Cell Tumor (Glioma) - A type of brain cancer originating from glial cells.
• Luciferase Lentivirus - Virus used to tag cells with luciferase for tracking purposes.
• Luciferase Structure - The specific formation of luciferase enzyme.

• Introduce Glioma Stem Cells and how they relate to brain cancer (e.g., glioma).
• Outline the role of luciferase in cell tracking and how it is introduced (e.g., luciferase lentivirus).
• Explain how luciferase cells are prepared for scientific experiments.
• Connect to the process of tagging GSCs with luciferase and its implications in cancer research.

• [Question 1] What are luciferase cells and how are they used in brain cancer research?
• [Question 2] How is the luciferase enzyme introduced into GSCs?
• [Question 3] How is the process of tagging GSCs with luciferase conducted?

• Describe how luciferase tagging aids in drug screening for brain cancer (e.g., glioma).
• Identify the potential impact on the medical industry, particularly in cancer research (e.g., glioma stem cells).
• Highlight the importance of this research to the broader scientific and medical communities.
• Link luciferase cell tagging to potential advancements in cancer treatment solutions.