Modelo de células madre de glioma marcadas con luciferasa: un método mediado por lentivirus para preparar células madre de glioma marcadas con luciferasa para estudios terapéuticos in vitro
Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Investigación sobre el cáncer
0 visualizaciones • 3:17 min. • April 30th, 2023
Las células madre del glioma o GSC son una subpoblación de glioma, un cáncer de células gliales en el cerebro.
El etiquetado de estas GSC con enzimas bioluminiscentes como la luciferasa ayuda a establecer ensayos de imágenes de alto rendimiento para la detección de fármacos.
Para preparar las GSC marcadas con luciferasa, comience con un cultivo de GSC en un medio de crecimiento adecuado.
Centrifugar el cultivo para obtener un sedimento celular y eliminar el sobrenadante.
Agregue enzimas digestivas adecuadas al gránulo. Estas enzimas disocian los grupos celulares y degradan cualquier rastro de tejido conectivo para obtener una suspensión unicelular.
Ahora, centrifuga la suspensión unicelular y retira el sobrenadante. Vuelva a suspender el gránulo en un medio fresco.
A continuación, siembre la concentración deseada de células en una placa de cultivo.
Incube el cultivo y deje que las células se adhieran a la placa de cultivo.
Posteriormente, agregue el título deseado de una construcción de gen que contenga virus para la proteína fluorescente verde mejorada con luciferasa o EGFP e incube.
El virus interactúa con los receptores de superficie de las GSC, desencadenando la liberación de A
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