Generación de un modelo murino de infarto de miocardio: un procedimiento quirúrgico para la ligadura permanente de la arteria coronaria descendente anterior izquierda en un modelo de ratón

Para comenzar, prepare un ratón anestesiado en posición supina. Hacer una incisión longitudinal en su cuello y desplazar las glándulas salivales. A continuación, separe la fascia, una capa de tejido conectivo que rodea los músculos de la correa, para revelar la tráquea subyacente.

A través de la boca, inserte una cánula de intubación y confirme la inserción traqueal precisa a través de la incisión. Conecte la cánula al ventilador ajustado a los parámetros deseados, que proporcionan una ventilación adecuada al ratón.

Ahora, coloque el mouse en una posición de decúbito lateral derecho. Haga una incisión en la piel entre los músculos pectorales izquierdos y separe la fascia. Cambie el ventilador a presión positiva al final de la espiración o a la configuración de PEEP.

Realice una toracotomía del lado izquierdo en el tercer espacio intercostal, una incisión realizada entre la tercera y cuarta costillas. La presión positiva en las vías respiratorias durante el modo PEEP evita el colapso alveolar durante la toracotomía.

Después de acceder al corazón, retire el pericardio. Identifique la arteria coronaria descendente anterior izquierda o LAD, un vaso rojo brillante que se ramifica desde la arteria coronaria izquierda. La arteria LAD suministra sangre a la mayor parte del ventrículo izquierdo.

Ate quirúrgicamente la arteria LAD proximal a las aurículas izquierdas. Esta ligadura de la arteria LAD causa palidez del ventrículo. Cierre la incisión. Regrese al animal a su jaula. La ligadura permanente de la arteria LAD obstruye el flujo sanguíneo y el suministro de oxígeno a los músculos del corazón, lo que provoca su daño y la muerte.

Use una maquinilla de afeitar eléctrica para afeitar rápidamente a un ratón macho C57BL/6 de 25 a 30 gramos anestesiado en la garganta y el lado izquierdo de la caja torácica. Confirme la falta de respuesta al pellizco del dedo del pie. Aplique ungüento en los ojos del animal. Coloque el mouse en posición supina sobre una almohadilla térmica y coloque una pequeña compresa de gasa debajo de la cabeza para evitar sobrecalentar los ojos.

Asegure las extremidades con cinta adhesiva. Pase un lazo de sutura de seda 5-0 debajo de los incisivos superiores y asegure la extremidad del lazo en la almohadilla térmica para mantener la boca abierta durante la canulación. Aplicar crema depilatoria en las zonas previamente afeitadas y masajear suavemente con un bastoncillo de algodón durante 1 minuto.

Retire el exceso de pelo y crema con una gasa y limpie la piel expuesta con gotas de solución salina al 0,9% y gasa. Aplique trozos de gasa estéril en la garganta y el tórax afeitados y empape la gasa con yodopovidona. Ajuste el ventilador a un volumen corriente de 7 mililitros por kilogramo y una velocidad de ventilación de 140 golpes por minuto.

Mueva el ratón bajo un microscopio estereoscópico de microcirugía. Sosteniendo la piel en el centro de la garganta, haga una incisión de 0,5 centímetros a lo largo de la línea caudal / cefálica y separe los lóbulos de la glándula salival. Use fórceps curvos para separar suavemente la fascia del músculo esternohioideo hasta que la laringe y la tráquea sean visibles. Luego, asegure los bordes de la abertura con retractores unidos a bandas elásticas.

Luego, tire suavemente de la lengua hacia los lados y use fórceps para insertar la aguja interna roma de una cánula de calibre 16 en la tráquea. Visualice una correcta inserción en la tráquea a través de la incisión de la garganta y conecte la cánula al ventilador. Coloque solución salina estéril al 0,9% suplementada con gasa empapada en yodopovidona sobre la incisión para mantener los tejidos húmedos durante la operación.

Luego, coloque el tubo de escape en agua. La presencia de burbujas indica una intubación exitosa. Para la ligadura de la arteria coronaria descendente anterior izquierda o LAD, mueva con cuidado el ratón a la posición de decúbito del lado derecho y vuelva a asegurar la extremidad anterior izquierda en la nueva posición.

Identifique la línea entre los músculos pectorales menores y mayores izquierdos y haga una incisión oblicua en la piel de 1 centímetro a lo largo de la línea. Con microtijeras de disección romas, separe la fascia de los músculos pectorales sin incidir los tejidos y use retractores unidos a bandas elásticas para mantener la separación.

Configure el ventilador con una presión positiva al final de la espiración de 3 centímetros de agua. Use fórceps romos para abrir la cavidad torácica en el tercer espacio intercostal entre la tercera y la cuarta costilla. Coloque dos retractores en la caja torácica, uno en cada costilla, y use unas pinzas finas curvas para extraer con cuidado el pericardio sin dañar el corazón y los pulmones.

Ubique la LAD como una línea superficial de color rojo brillante que va desde el borde de la aurícula izquierda hacia el ápice. Use un portaagujas para pasar una sutura de seda 7-0 debajo del LAD, de 2 a 3 milímetros por debajo de las aurículas izquierdas. Tirando de la seda lentamente para evitar rasgar el tejido cardíaco, ate la ligadura con tres nudos. La parte inferior izquierda del ventrículo izquierdo palidecerá instantáneamente al ligar.

Ahora, suelte los retractores de costillas y, sosteniendo la tercera costilla con fórceps, haga dos pasadas con la sutura de seda 6-0 debajo de la tercera y cuarta costillas. Coloque tres gotas de solución salina al 0,9% a 37 grados Celsius en la abertura y cierre el tubo de escape de espiración durante 2 o 3 ciclos respiratorios para inflar adecuadamente los pulmones.

Apriete y asegure la sutura con dos lanzamientos y suelte los retractores que sujetan los músculos, lo que ayuda a que los músculos regresen a su ubicación anatómica correcta. Luego, cierre la piel torácica con dos puntos y dos lanzamientos de seda de sutura 5-0. Cerrar la piel de la garganta con un punto de sutura 5-0 de seda y dos lanzamientos.