Aislamiento de ovario de ratón neonatal: un procedimiento quirúrgico para extraer un par de ovarios a partir de un modelo de ratón neonatal

Para aislar los ovarios de ratón neonatal, comience con un cachorro de ratón neonatal sacrificado en posición supina en una plataforma quirúrgica. Hacer una incisión quirúrgica larga en la piel y la pared del cuerpo para exponer la cavidad abdominal. A continuación, desplaza suavemente los intestinos para revelar los cuernos uterinos subyacentes.

Los cuernos uterinos son dos estructuras tubulares largas que convergen en el cuello uterino y se extienden desde la vejiga hacia los riñones. Identifique los ovarios, glándulas pequeñas de forma ovalada, ubicadas justo debajo de los riñones en la punta de los cuernos uterinos, conectados a través de los oviductos.

Ahora, corte el sitio de unión del ovario de cada cuerno uterino para liberar los ovarios. Transfiera inmediatamente los ovarios extirpados a una placa de cultivo estéril que contenga medios precalentados adecuados para mantener la viabilidad de los ovocitos dentro del tejido. Coloque la placa de cultivo en la platina calentada de un microscopio de disección.

Con una aguja, retire con cuidado la bolsa ovárica, un saco de tejido conectivo que rodea el ovario y cualquier resto del oviducto. Finalmente, transfiera los ovarios a una placa de múltiples pocillos que contenga medios. Los ovarios aislados se pueden utilizar para el procesamiento posterior.

Comience transfiriendo 1 mililitro de medio de disección en cada plato de embriones de vidrio estéril. Después de sacrificar a los cachorros de 0 a 5 días posnatales, agarre la piel que cubre la pared abdominal con fórceps finos e incida en la piel y la pared del cuerpo. Abra esta incisión grande, exponiendo el abdomen. La vejiga generalmente está congestionada en esta etapa y se puede perforar para facilitar la disección.

Con pinzas de relojero, aparta las tripas. Luego, a cada lado, siga los cuernos uterinos desde la vejiga hasta el riñón. El ovario es una estructura similar a una nube ubicada justo debajo del riñón en la parte superior del útero. Sujete el ovario suavemente y, con unas tijeras, córtelo del útero. Después de diseccionar ambos ovarios, transfiéralos a platos llenos de medio de disección tibio.

Use un microscopio de disección con una platina calentada a 37 grados Celsius para diseccionar los ovarios. Con agujas de insulina, recorte el saco de la bolsa y cualquier exceso de material, incluida la trompa de Falopio, hasta que solo quede el ovario. Luego, transfiera cada ovario al pocillo de una placa preparada con una pipeta curva.