Fundición de resina del sistema biliar: una técnica para analizar la arquitectura 3D del sistema biliar en un modelo murino mediante inyección de resina radiopaca

El sistema biliar está formado por el hígado, la vesícula biliar y una red de conductos que se unen para formar el conducto biliar común o C-B-D, que transporta la bilis al intestino.

Para el yeso de resina del sistema biliar, tome un ratón que haya sido perfundido para extraer sangre del hígado y la vesícula biliar.

Coloque el ratón en posición supina.

Visualice la cavidad abdominal bajo un microscopio de disección para localizar la superficie visceral del hígado e identificar el esfínter de Oddi, una capa muscular presente en el extremo distal del CBD antes de que ingrese al intestino.

Hacer una incisión oblicua en el CBD junto al esfínter de Oddi.

Inserte el tubo en el CBD. Conecte el otro extremo del tubo a una jeringa que contenga una suspensión de resina coloreada y radiopaca.

Inyecte la suspensión de resina en el conducto.

La resina se mueve desde el CBD hacia la red de conductos biliares más pequeños, y finalmente se propaga dentro del hígado y la vesícula biliar. La propagación se puede rastrear visualizando el movimiento de la resina coloreada a través de los terminales de pequeños conductos.

Retire el tubo y deje que la resina se polimerice.

Obtener las imágenes de micro-CT de los conductos. La resina al ser radiopaca no permite que los rayos X pasen a través de ella, proporcionando un contraste al sistema biliar y ayudando a analizar su arquitectura 3D.

Antes de inyectar resina en el sistema biliar del ratón, comience a mover el intestino y el páncreas hacia el lado izquierdo del ratón con un hisopo de algodón, humedecido con PBS, para exponer el conducto biliar común y la vena porta. Luego, haga una pequeña incisión transversal en la vena cava inferior. Voltee el lado ventral del hígado hacia el corazón para exponer la superficie visceral y la región hiliar, y ubique el conducto biliar común que va desde la región hiliar a través del páncreas y hacia el intestino en el esfínter de Oddi. Use las pinzas rectas para despejar el área de tejido circundante de aproximadamente 5 milímetros del conducto biliar común.

Luego, colocando un hilo de sutura de seda debajo del conducto biliar común, haga un nudo simple suelto alrededor del conducto biliar común. Sostenga las tijeras de resorte planas contra el conducto biliar común para hacer una incisión oblicua en el conducto biliar común en el lugar donde el conducto biliar común ingresa al páncreas y al intestino, junto al esfínter de Oddi. A continuación, mezcle 1 mililitro de resina amarilla con 50 microlitros del agente de curado MV y llene una jeringa Luer de 1 mililitro con la mezcla de resina y agente de curado.

Conecte la jeringa llena con el juego de tubos #1 y presione el émbolo para llenar el tubo hasta que la mezcla de resina y agente de curado gotee de la punta del tubo. Use las pinzas para enderezar el área alrededor de la incisión del conducto biliar común, antes de insertar el tubo en la abertura del conducto biliar común, con el borde más largo de la punta biselada hacia abajo hacia el lado dorsal del conducto biliar. Luego, apriete el nudo de hilo de seda para asegurar el tubo dentro del conducto biliar común.

Después de inyectar la resina en el conducto biliar común, observe la vesícula biliar y los lóbulos hepáticos individuales. Masajee el hígado con un hisopo de algodón humedecido con PBS para ayudar a distribuir la resina por igual. Las ramas terminales de los conductos biliares llenos de resina serán débilmente visibles en la superficie del hígado. Deje de inyectar la resina cuando aparezcan puntos de resina en la superficie del hígado o cuando se encuentre resistencia. Luego, retire el tubo sacándolo del conducto biliar común y apriete rápidamente el nudo de seda con fórceps para evitar que la resina se escape.