JoVE Encyclopedia of Experiments
Biología
0 vistas • 3:48 min • July 8th, 2025
En un modelo de ratón de diabetes insulinodependiente, los islotes pancreáticos se inyectan a través de la vena porta hepática con fines terapéuticos. Las células beta dentro del grupo de islotes producen insulina, una hormona que regula los niveles de glucosa en sangre.
La inyección intraportal es una técnica simple y efectiva, pero el sangrado postoperatorio a menudo conduce a la muerte del animal modelo. Para evitar esta complicación, prepare un ratón anestesiado en posición supina. Afeitar la zona abdominal y aplicar una solución desinfectante. Hacer una incisión para exponer la cavidad peritoneal. Exteriorizar los intestinos desde la cavidad peritoneal sobre una gasa húmeda para exponer la vena porta inferior.
Tome una jeringa de insulina precargada con islotes. Inserte la aguja directamente paralela en la vena porta, con su bisel hacia abajo. Extraiga un poco de sangre en una jeringa para mezclar los islotes y luego inyecte lentamente. Tire y empuje el émbolo varias veces para infundir toda la suspensión del islote. Ahora, coloque una esponja de gelatina para cubrir el lugar de la inyección.
La gelatina, una matriz hemostática, absorbe sangre y se hincha para formar un coágulo estable sobre el sitio de punción, deteniendo así el sangrado. A continuación, regrese el intestino a la cavidad peritoneal y sutura la incisión. Regrese al ratón a su jaula de origen y controle regularmente los signos de recuperación.
Después de confirmar una falta de respuesta al reflejo del pedal, aplique ungüento en los ojos para evitar que se sequen. Afeitar el abdomen del ratón anestesiado para eliminar el pelaje y desinfectar el área quirúrgica con tres toallitas alternas de yodo al 2% y alcohol al 75%.
Luego, haga una incisión de 1 a 1,5 centímetros en el abdomen y abra la cavidad peritoneal. Coloque un trozo de gasa estéril alrededor de la incisión y use fórceps o puntas de algodón para transferir suavemente el intestino a la gasa. Luego, cubra el intestino con un trozo de gasa empapada en solución salina y exponga la vena porta.
Para detener el sangrado inducido por la transferencia de islotes con espuma de gel, sostenga la aguja con el bisel hacia abajo y coloque la punta de la aguja con la abertura paralela a la pared de la vena porta. Antes de insertar la aguja en la vena porta, retraiga el émbolo para extraer de 20 a 50 microlitros de sangre en la jeringa para mezclarla con los islotes antes de infundir los islotes en la vena porta mientras presiona y retrae repetidamente el émbolo.
Cuando se hayan entregado todos los islotes, coloque aproximadamente un trozo de espuma de gel de 0,5 x 0,5 centímetros sobre el lugar de la inyección. Use una punta de algodón para presionar la espuma de gel hacia abajo, mientras retira la aguja de la vena porta. Mantenga el gel en su lugar durante unos dos minutos, enrollando la espuma de gel para asegurarse de que cubra la vena porta.
Una vez que el sangrado se haya detenido, regrese suavemente el intestino a la cavidad peritoneal en la posición original e inyecte 500 microlitros de solución salina tibia en la cavidad abdominal. Use suturas para cerrar las capas musculares y de la piel. Luego, coloque al ratón en una jaula limpia sobre una almohadilla térmica con monitoreo hasta que se recupere por completo de la anestesia, administrando analgesia cada 12 horas y calor durante 48 horas.