Aislamiento de nodo sinoauricular a partir de un modelo de ratón: un procedimiento para recolectar un nodo SA del corazón murino

En el corazón, el nódulo sinoauricular o el nódulo S-A contiene células musculares especializadas que inician y propagan continuamente impulsos eléctricos por todo el corazón, estableciendo la frecuencia de los latidos del corazón.

Para aislar el nódulo S-A, primero, prepare un ratón sacrificado tratado con anticoagulante en posición supina. El tratamiento anticoagulante ayuda a prevenir los coágulos de sangre para un aislamiento eficiente de los tejidos.

A continuación, haga una incisión transversal en la piel y luego corte las paredes laterales de la caja torácica para acceder al contenido de la cavidad torácica y exponer el corazón subyacente.

Hidratar el corazón con tampón que contenga anticoagulantes. Extirpar los pulmones junto con la tráquea.

Cortar los vasos sanguíneos principales para extirpar el corazón de la cavidad torácica. Transfiera el corazón extirpado a un plato forrado con elastómero de silicona que contenga tampón para manipular el delicado órgano.

Asegura el vértice del corazón. Ahora, ubique la posición de la vena cava inferior y superior dentro de la aurícula derecha. Además, identifique la ubicación del nódulo S-A dentro del parche de tejido entre las venas cavas.

Retire el ápice para drenar la sangre del corazón. Ahora, separe las aurículas de los ventrículos. Corte a lo largo del tabique interauricular para extirpar la aurícula izquierda. Coloque la aurícula derecha plana y extraiga el tejido del nódulo S-A.

Comience sosteniendo la piel del ratón sacrificado con un hemostático y use tijeras quirúrgicas para hacer una incisión transversal en la piel, justo debajo de la parte inferior de la caja torácica desde el arco costal izquierdo hasta el arco costal derecho. Use tijeras quirúrgicas para abrir el peritoneo y separe con cuidado el hígado del diafragma. sin cortar el hígado, para evitar un sangrado excesivo.

Haga una incisión en el diafragma a lo largo del tórax para exponer la cavidad torácica. Use las tijeras quirúrgicas para cortar las paredes laterales de la caja torácica, desde los bordes de los arcos costales hasta las clavículas, para exponer el corazón. Luego, use una aguja de jeringa calibre 23 para sujetar la caja torácica sobre el hombro.

Use una pipeta de transferencia para dejar caer la solución tibia de Complete Tyrode heparinizada sobre el corazón para mantenerlo húmedo. Sostenga los pulmones con pinzas Graefe extra finas y corte la tráquea con tijeras quirúrgicas para extirpar los pulmones. Para extirpar el corazón, sostenga el vértice del corazón con pinzas Graefe extrafinas y corte la aorta y la vena cava inferior con unas tijeras quirúrgicas.

Transfiera el corazón a una placa de Petri que contenga un elastómero de silicona curado y use una pipeta de transferencia para bañar el corazón con 2 a 3 mililitros de solución tibia de Complete Tyrode heparinizada. Fije el vértice del corazón al plato con un alfiler de disección.

Sostenga la vena cava inferior con pinzas de laminectomía Dumont # 2. Inserte una aguja de jeringa de calibre 22 a través de la vena cava inferior y superior para ubicar su posición en la aurícula derecha, que también identifica la posición aproximada del nódulo sinoauricular.

Sostenga el apéndice auricular derecho con fórceps de laminectomía Dumont # 2 y coloque un clavo de disección a través del apéndice auricular derecho para mantenerlo en su lugar. Repita el mismo procedimiento para el apéndice auricular izquierdo. Luego, retire la aguja de la jeringa que se extiende por la vena cava.

Use tijeras Castroviejo para extirpar el vértice del corazón haciendo una incisión transversal a través de los ventrículos o liberando la sangre del corazón. Luego, lave el corazón agregando una solución tibia heparinizada Complete Tyrode. Use tijeras Castroviejo para cortar a lo largo del tabique auriculoventricular hasta que las aurículas se separen de los ventrículos y mantenga la incisión más cerca del ventrículo.

Corte a lo largo del tabique interauricular para extirpar la aurícula izquierda. Coloque los clavos de disección en la periferia de la aurícula derecha para que quede plana. Retire cualquier resto de grasa, vasos o tejido de la aurícula con las tijeras Castroviejo y ubique el nódulo sinoauricular en la aurícula derecha.