Instalación de una ventana de imagen pancreática intravital en un modelo de ratón: una ventana de imagen pancreática integrada para la obtención de imágenes in vivo de lapso de tiempo de la microestructura del páncreas murino

La microscopía intravital de alta resolución, a través de una ventana de imágenes pancreáticas implantada, facilita la visualización a largo plazo y a nivel celular de área amplia de los islotes pancreáticos en un animal vivo.

Para la implantación de ventanas de imágenes pancreáticas, primero, coloque un ratón anestesiado en una posición lateral izquierda. A continuación, fije una sonda para controlar la temperatura del ratón y regular su temperatura con una almohadilla térmica. Ahora, afeitar el flanco izquierdo y esterilizar el área.

Haga una incisión quirúrgica y diseccione los músculos abdominales. Inserte las suturas apropiadas en el margen de la incisión para fijar el marco de la ventana de imágenes en su posición después de la implantación. Además, exponga y exteriorice el bazo e identifique el páncreas conectado.

A continuación, superponga el páncreas conectado con el bazo en la placa de la ventana de imágenes pancreáticas personalizada, con el bazo colocado en el espacio abierto de la ventana. Esta posición del páncreas lo aísla eficazmente de las deposiciones vecinas, reduciendo los artefactos inducidos por el movimiento durante las imágenes. Aplique con cuidado pegamento de cianoacrilato en el margen de la ventana de imágenes, evitando los órganos.

Monte una cubierta de vidrio sobre el margen de la ventana de imágenes. Apriete las suturas alrededor de la ventana de imágenes para asegurar la ventana en su lugar. El ratón con la ventana de imágenes pancreáticas implantada está listo para imágenes pancreáticas intravitales.

Comience preparando la plataforma quirúrgica y desinfectando las superficies con etanol al 70%. Después de la anestesia, use una sonda rectal con una almohadilla térmica controlada homeotérmicamente para controlar la temperatura corporal.

Retire el vello del flanco izquierdo del ratón y aplique alcohol y yodo alternativamente, girando desde el sitio de la incisión hacia la superficie exterior, nunca volviendo al sitio de la incisión y terminando con yodo. Luego haga una incisión de 1,5 centímetros en el flanco izquierdo del ratón diseccionando la piel y el músculo.

Use una sutura negra o de nailon 4-0 para realizar una sutura de cordón en el margen de la incisión. Agrupe el bazo cuidadosamente con fórceps de anillo e identifique el páncreas. Colocando la ventana en el flanco del ratón, pase el bazo y el páncreas a través del espacio abierto de la ventana.

Luego, coloque suavemente el páncreas en la placa de la ventana de imágenes mientras coloca el bazo en el espacio abierto de la ventana. Use una aguja de catéter de calibre 31 para aplicar gotas de pegamento de cianoacrilato de N-butilo en el margen de la ventana de imágenes, asegurando que se aplique una cantidad mínima de pegamento.

Aplique suavemente una cubierta de vidrio redonda de 12 milímetros en el margen de la ventana de imágenes. Luego, sostenga el lazo de sutura para que encaje en la ranura lateral de la ventana y átelo tres veces. Finalmente, para evitar la interrupción de estos puntos apretados cuando los ratones están despiertos, corte el sitio proximal máximo de la corbata.