0 visualizaciones • 4:44 min. • July 8th, 2025
Comience colocando un ratón anestesiado en posición supina. Diseccionar la cavidad torácica para visualizar el corazón. Use una pipeta equipada con una punta de orificio ancho para aplicar presión de succión y aspirar el corazón del cuerpo del ratón hacia la punta. Extirpe el corazón en la aorta para extraerlo del cuerpo del ratón.
Sumerja el corazón aislado en un vaso de precipitados que contenga un tampón rico en nutrientes complementado con un agente anticoagulante. El anticoagulante en el tampón forma un complejo con calcio presente en los cardiomiocitos, las células del músculo cardíaco, que cesan la contracción de los músculos cardíacos y previenen la coagulación de la sangre.
A continuación, coloque el corazón con el ápice hacia abajo en un soporte para corazones mantenido en una placa de Petri que contenga un tampón adecuado. Sujete la aorta por encima de las aurículas y transfiera el corazón pinzado a una placa de perfusión.
Posteriormente, tome un conjunto de jeringa-aguja que contenga un tampón de perfusión apropiado. Inserte la aguja en el ventrículo izquierdo perforando la cámara ventricular.
Con la aorta pinzada, la inyección intraventricular presuriza las válvulas aórticas para que se abran. En consecuencia, el tampón enjuaga la sangre anterógradamente a través de las arterias coronarias, perfundiendo completamente los músculos del corazón. Finalmente, el tampón se difunde a través de las venas pulmonares. Esto proporciona un corazón perfundido con éxito para aplicaciones posteriores.
Para la recolección de corazón de ratón, después de confirmar la eutanasia y afeitar el abdomen, abra la cavidad torácica rápidamente para exponer el corazón y use una pipeta de transferencia de plástico con la punta cortada aproximadamente al tamaño del corazón, para succionar el corazón en la pipeta. Levante la pipeta para crear suficiente espacio para insertar unas tijeras curvas, y use las tijeras para extirpar el corazón del lado dorsal, teniendo cuidado de no dañar las aurículas.
Inmediatamente, coloque el corazón en un vaso de precipitados de vidrio de 30 mililitros que contenga CIB EGTA helado durante aproximadamente 1 minuto. Cuando las contracciones se hayan detenido, coloque el corazón en una placa de cultivo de 35 mililitros que contenga CIB EGTA helada y extraiga el pulmón y otros tejidos visibles.
Coloque el corazón toscamente limpio en un soporte para el corazón lleno de CIB EGTA frío, con el ápice hacia abajo, y coloque el soporte bajo un microscopio estereoscópico. Retire la grasa y los tejidos conectivos alrededor de la aorta. Si la longitud de la aorta cortada es demasiado larga, recorte la aorta justo debajo de la arteria braquiocefálica y oriente el corazón de modo que la superficie anterior quede hacia adelante. Use pinzas para levantar el extremo de la aorta y use una pequeña pinza vascular para sujetar la aorta cerca de las aurículas, mientras empuja suavemente hacia abajo las aurículas.
Luego, coloque el corazón pinzado en una placa de perfusión, con la cara anterior hacia arriba, e hidrate el corazón con unas gotas de CIB EGTA. Para la perfusión anterógrada, cargue una jeringa de 20 mililitros que contenga CIB EGTA precalentada conectada a un tubo de extensión flexible y una aguja de inyección marcada, en la bomba de infusión, y encienda la bomba a un caudal de 0,5 mililitros por minuto. Cuando se hayan llenado la aguja y la bomba, coloque la aguja de inyección en la placa de perfusión, con el lado más corto de la forma diagonal al frente, y deslice la aguja hasta que toque el vértice del corazón.
Con cuidado, inserte la aguja cerca del vértice del ventrículo izquierdo, en la cámara ventricular sin torcer ni separar la aguja de la placa, observando la marca para estimar la profundidad de la inserción de la aguja. Cuando se completa la inserción de la aguja, la sangre debe comenzar a fluir desde la arteria coronaria.
Use cinta adhesiva para fijar la aguja de inyección a la placa y aumente la velocidad de la bomba a 1 mililitro por minuto. Si el corazón se perfunde con éxito, el flujo del tampón en el capilar debería ser visible justo debajo del epicardio.