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El ultrasonido de ultra alta frecuencia, o UHFUS, facilita la obtención de imágenes de alta resolución espacial de estructuras superficiales en un animal vivo.
Para comenzar, coloque un ratón anestesiado en posición supina en la plataforma calefactada de una estación de imágenes para regular su temperatura corporal. Inserte una sonda para controlar la temperatura corporal.
A continuación, cubra las extremidades con pasta conductora y asegúrelas a los electrodos de electrocardiograma incrustados en la plataforma para monitorear los parámetros fisiológicos. Retire el pelo de la región inguinal del ratón. Aplique el medio de acoplamiento acústico para proporcionar un camino eficiente para la propagación de ultrasonidos. Coloque el transductor UHFUS sobre la región inguinal.
Durante la exploración, el transductor emite pulsos de ultrasonido de frecuencia ultra alta con profundidad de penetración reducida en el ganglio linfático inguinal superficial. Según la densidad y el tamaño de los ganglios linfáticos, el transductor refleja y recibe una fracción de los pulsos de ultrasonido con amplitudes variables, convirtiendo estas señales en señales eléctricas.
Además, la computadora los reconstruye para obtener una imagen de ultrasonido bidimensional de alta resolución, en la que el brillo de cada punto está determinado por la amplitud de las señales reflejadas. Escanee toda la región del ganglio linfático mediante el movimiento lineal del transductor para obtener una secuencia de imágenes de eje corto.
Utilizando un software adecuado, procese posteriormente las imágenes de ultrasonido adquiridas para crear una imagen de ultrasonido en 3D del ganglio linfático inguinal y medir su volumen.
Después de confirmar la anestesia, transfiera al animal a una tabla calentada de la estación de imágenes de ultrasonido de ultra alta frecuencia, sosteniendo al animal en posición supina. Ajuste la temperatura de la placa con una sonda rectal lubricada con vaselina para mantener la temperatura corporal del ratón en el rango fisiológico.
Cubra las patas delanteras y traseras con pasta conductora y péguelas con cinta adhesiva a los electrodos de la placa de ECG incrustados en la placa. Compruebe que los parámetros fisiológicos se adquieren y muestran correctamente.
Eliminar el vello de ambas zonas inguinales aplicando un agente depilatorio, y recubrirlas con un medio de acoplamiento acústico. Luego, sujete la sonda lineal de ultrasonido de ultra alta frecuencia en un motor 3D especializado integrado en la estación de imágenes, lo que permite un movimiento automatizado y escalonado de la sonda.
Oriente y ajuste adecuadamente la posición de la sonda de ultrasonido para obtener imágenes de eje corto del ganglio linfático inguinal y coloque la región de interés en la zona focal.
Establezca la distancia de exploración entre dos y cinco milímetros, el tamaño del paso en 44 micrómetros, con un resultado de 46 a 114 pasos de exploración por corte de ganglio linfático y un tiempo de adquisición de 1 a 3 minutos por animal.
Escanee todo el volumen del ganglio linfático inguinal como una secuencia de imágenes 2D en modo B, adquiriendo imágenes en múltiples niveles mediante el movimiento lineal del transductor con tamaños de paso a escala micrométrica, para generar datos 3D en términos de respiración y bucles de cine con compuerta cardíaca.
Después de la obtención de imágenes, almacene digitalmente las imágenes adquiridas en formato RAW para posteriores análisis fuera de línea.