JoVE Encyclopedia of Experiments
Biología
0 vistas • 2:45 min • July 8th, 2025
El ojo murino está cubierto por tres capas: la esclerótica fibrosa más externa, la capa coroidea media y la retina más interna. La cavidad en forma de copa entre la retina y el cristalino del ojo contiene humor vítreo, un medio gelatinoso que ayuda a transmitir la luz a la retina. A su vez, la retina pasa la información visual resultante a través del nervio óptico al cerebro.
Para extraer la copa de la retina, tome un ratón sacrificado y enuclee su ojo. Sumerja el ojo en una placa de Petri que contenga un tampón helado adecuado para evitar la degradación del tejido. Coloque la placa de Petri bajo un microscopio de disección.
Corta los restos del nervio óptico de la base del globo ocular. Haga una pequeña incisión en la unión de la retina y la córnea, una cubierta transparente alrededor del cristalino del ojo. Usando esta abertura, haga un corte circular completo a lo largo de la unión retina-córnea para separar el cristalino y el gel de humor vítreo del ojo.
Retire el cristalino y el humor vítreo para obtener una copa ocular semicircular que contenga la retina revestida por la coroides y la esclerótica. Crea múltiples cortes superficiales en toda la parte escleral de la copa ocular. Utilice estos cortes para separar las capas externas de los ojos para obtener una copa retiniana intacta para aplicaciones posteriores.
Enuclee los ojos de un ratón adulto sacrificado y colóquelos en PBS helado en una placa de Petri, luego, coloque la placa de Petri bajo un microscopio de disección. Con unas microtijeras, corte el nervio óptico y luego retire con cuidado los músculos rectos adicionales unidos fuera del globo ocular.
Con una aguja de calibre 30, haga un agujero en el borde de la córnea. Luego, use microtijeras de disección fina para hacer un corte circular a lo largo del borde de la córnea. Con pinzas de disección afiladas, retire la córnea, el cristalino y el humor vítreo de la copa ocular. Haga varios cortes pequeños en la capa escleral en el borde de la copa ocular con microtijeras de disección fina. Use dos pinzas de disección afiladas para sujetar el tejido escleral a cada lado y tire de la capa escleral con mucho cuidado para eliminarla de la retina neural. Repita esto alrededor de la copa ocular hasta que se elimine toda la esclerótica y se obtenga una copa retiniana intacta.