0 visualizaciones • 4:19 min. • July 8th, 2025
Para comenzar, asegure un ratón sacrificado en posición supina. Incide lateralmente a través de la pared torácica para acceder a la cavidad torácica y exponer el corazón. Extirpe la aurícula derecha e inyecte solución salina en el ventrículo izquierdo para drenar la sangre del corazón.
Cortar las conexiones vasculares cortando los vasos sanguíneos principales. Además, haga una incisión en la arteria pulmonar a una distancia adecuada de la unión ventrículo-arterial, que sirve como conducto para la presurización. Extirpar los ventrículos para exponer el lado ventricular a la presión atmosférica.
Ahora, asegure un tubo de presurización en la arteria pulmonar, asegurando un espacio adecuado entre la unión ventrículo-arterial y el extremo del tubo para permitir que las valvas de la válvula se muevan durante la presurización.
Al tubo, conecte el depósito lleno de solución salina fijado a una altura calculada en relación con la válvula pulmonar en función de la presión hidrostática deseada que se aplicará al lado arterial de la válvula. El flujo unidireccional desde el lado arterial con la presión hidrostática aplicada da como resultado el cierre de las valvas de la válvula y la distensión del tronco pulmonar.
Posteriormente, introducir un fijador adecuado en el yacimiento y continuar la perfusión. El fijador perfundido estabiliza la morfología celular y la arquitectura tisular.
Coloque una gasa empapada en fijador sobre el tejido para fijar el tejido que rodea la válvula y evitar que se seque. Guarde la válvula cardíaca fija en fijador hasta su uso.
Comience esterilizando en autoclave las herramientas necesarias para la disección del ratón, incluidas tijeras finas, micropinzas, pinzas microvasculares, pinzas de aplicación de pinzas, soportes de microagujas, tijeras de resorte y retractores.
Después de sacrificar a un ratón adulto C57 Black 6, colóquelo en posición de decúbito dorsal en una bandeja, asegure sus extremidades con cinta adhesiva y realice la toracotomía. Exponga el corazón eliminando el exceso de tejido adiposo y fascia, luego retire la aurícula derecha y perfunda el ventrículo izquierdo con solución salina a temperatura ambiente.
Extirpe todo el corazón cortando la vena cava superior, la vena cava inferior, la arteria pulmonar y la aorta, y corte aproximadamente 2 milímetros por encima de la unión ventrículo-arterial, que servirá como conducto para la presurización.
Extirpe los ventrículos izquierdo y derecho para exponer las cámaras a la presión atmosférica, asegurando que la estructura del tronco pulmonar no se vea afectada por la extirpación de los ventrículos. Anastomosa el tubo de presurización con la arteria pulmonar, dejando aproximadamente 1 milímetro de distancia entre la unión sino-tubular y el extremo del tubo, para acomodar grandes movimientos de las valvas y el tronco pulmonar.
Eleve el depósito a una presión fisiológica análoga y llénelo con la solución salina. Pruebe el sistema de flujo continuo para asegurarse de que no haya obstrucciones ni burbujas de aire. Conecte una llave de paso a la válvula pulmonar anastomosada y asegure un flujo adecuado a través del tubo cambiando el tracto de salida. Una vez que el flujo sea suficiente, cambie el flujo de salida a la válvula pulmonar anastomosada y asegure la presurización del tronco pulmonar, identificada por la distensión del tronco.
Después de confirmar la presurización del tronco pulmonar, incorporar gradualmente la solución fijadora primaria, hasta purgar el 25% de la capacidad del reservorio de la solución salina. Coloque una gasa empapada en fijador sobre la muestra de tejido para evitar que se seque. Perfunda el fijador durante 3 horas, rellenando el depósito para mantener una presión constante.
Después de la perfusión, guarde la válvula cardíaca en la solución fijadora a 4 grados centígrados hasta su uso, hasta por 1 semana.