Modelado de la oclusión traqueal fetal transuterina en modelo murino: un procedimiento quirúrgico para la ligadura de la tráquea fetal en una ratón embarazada

Coloque un ratón preñado anestesiado de la edad de gestación deseada en posición supina. Esterilizar la zona abdominal. Realizar laparotomía, una incisión quirúrgica a través de la pared abdominal. Diseccionar los músculos abdominales para exponer la cavidad abdominal.

Identificar los cuernos uterinos, estructuras tubulares largas que albergan múltiples fetos, lo que les permite desarrollarse simultáneamente. Exteriorizar suavemente los cuernos uterinos desde la cavidad abdominal, colocándolos en orientación transversal. Además, visualice el cuello del embrión de ratón candidato.

Inserte suavemente una aguja quirúrgica con la sutura de grosor apropiado transversalmente a través de la región del cuerno uterino, lejos de la placenta. Avance la aguja más hasta la parte anterior del cuello donde se encuentra la tráquea. Dirija la aguja para que salga del cuello opuesto al cuerno uterino. Apriete con cuidado la sutura para ocluir la tráquea, asegurando la integridad de la pared uterina. Regrese los cuernos uterinos a la cavidad abdominal.

Inyecte solución salina tibia en la cavidad peritoneal para facilitar la progresión del embarazo. Cierre la incisión quirúrgica y deje que el ratón se recupere. El modelo establecido de oclusión traqueal fetal de ratón se puede utilizar para estudiar el impacto de la tráquea ocluida en el desarrollo pulmonar.

Limpie la superficie abdominal con alcohol y povidona yodada y mantenga condiciones estériles durante toda la operación. Realice una incisión vertical para la laparotomía de madres embarazadas y corte todas las capas por separado. Identifique los cuernos uterinos de cada lado y determine los fetos candidatos para la cirugía.

Operar dos fetos en cada cuerno uterino si hay un número par de fetos a cada lado, y en un feto en cada cuerno uterino si hay un número impar. Usando gafas de aumento de 2x para la visualización, coloque el cuerno uterino de manera transversal. Coloque a los cachorros boca arriba entre dos dedos usando los ojos y la cola como guía.

Aplique una presión suave en la cabeza del cachorro para permitir la extensión de la cabeza y la visualización del cuello. Realice la oclusión traqueal, o TO, con una aguja atraumática y una sutura de polipropileno 6-0. Mantenga la placenta a un lado y lejos de los puntos de entrada y salida de la aguja.

Inserte la aguja transversalmente a través del costado del útero, lejos de la placenta, a través de un tercio de la parte anterior del cuello. Luego, mueva la aguja suavemente hacia la línea media del cuello. Diríjalo a la parte anterior, luego, salga del cuello entre la tráquea y opuesto a la vaina carotídea y el útero.

Anudar la sutura, cuidando de mantener la integridad de las membranas y la pared uterina. Reemplace el cuerno uterino en el abdomen e inyecte 2 mililitros de solución salina tibia y estéril en la cavidad peritoneal antes del cierre.

Coloque una sutura de poliglactina 5-0 para cerrar la pared abdominal y cierre la piel con una sutura de seda que no corra. Aplique 0,1 mg / kg de buprenorfina por vía intraperitoneal para la analgesia y deje que la madre se recupere en una incubadora tibia. Observe que el animal operado puede alimentarse solo y mantenerlo solo en su jaula individual.