0 visualizaciones • 2:48 min. • July 8th, 2025
Las biopsias guiadas por colonoscópico en modelos murinos inducen sitios de heridas en el colon. Estos lechos de heridas se aíslan para estudios moleculares e histológicos para comprender el proceso de cicatrización de heridas en enfermedades inflamatorias del tracto gastrointestinal o GI.
Para comenzar el aislamiento del lecho de la herida, coloque un ratón experimental sacrificado con una herida inducida por colonoscópica en posición supina. Hacer una incisión en la piel abdominal y los músculos subyacentes para exponer la cavidad corporal.
Coloque unas tijeras cerradas debajo del colon y levántelas. Corta el colon en su punto medio y en el ano para separarlo del cuerpo. Enjuague el colon con un tampón apropiado para eliminar el contenido fecal.
Coloque los dos puntos sobre papel de filtro y córtelo longitudinalmente, con el lado mesentérico hacia abajo sobre el papel de filtro. Ahora, agregue tinte azul de metileno sobre el colon y observe bajo el microscopio.
El tinte tiñe el tejido muerto y granulado en el lecho de la herida, haciéndolo parecer más oscuro que el tejido sano circundante, lo que permite su fácil identificación. Preservar el lecho aislado de la herida para estudios de expresión génica.
En el punto final experimental apropiado, abra la piel y las capas musculares abdominales para exponer la cavidad corporal del animal de experimentación y coloque fórceps cerrados debajo del colon. Levante suavemente el colon para liberarlo del mesenterio subyacente y corte el tejido en su punto medio y en el ano para recogerlo del ratón.
Use una jeringa de 20 mililitros llena de PBS helado y equipada con una aguja de sonda para ratas para eliminar el contenido fecal; y coloque el colon despejado en un trozo de papel de filtro. Abrir el colon longitudinalmente, cuidando que el lado mesentérico quede boca abajo contra el papel de filtro, y utilizar una pipeta Pasteur para cubrir la mucosa con azul de metileno al 0,2%.
Después de unos segundos, drene el exceso de tinción y observe el colon bajo un microscopio de disección para localizar el lecho de la herida. Use tijeras de microiris de 4 pulgadas para cortar alrededor del borde de la cama, teniendo cuidado de no cortar la capa muscular, y use pinzas de punta fina para transferir el tejido diseccionado a un tubo para congelarlo y / o almacenarlo rápidamente.