0 visualizaciones • 3:53 min. • July 8th, 2025
Comience con un ratón sacrificado en posición supina. Esterilice su extremidad posterior. Extirpe quirúrgicamente la piel y la fascia, una delgada envoltura de tejido conectivo debajo de la piel, para exponer los músculos subyacentes de las extremidades posteriores.
Ubique el músculo tibial anterior o TA en el lado lateral de la tibia. Sosteniendo el tendón distal TA, separe el músculo del tejido subyacente. Corte el músculo cerca de la rodilla para extirpar el músculo TA, revelando el músculo extensor largo de los dedos subyacente o músculo EDL ubicado en el compartimento anterior de la extremidad posterior.
Haga una incisión en el tendón EDL distal y tire del músculo EDL hacia la rodilla. Corte el tendón EDL proximal para extirpar el músculo EDL. Transfiera el músculo recolectado a un tubo con medios precalentados que contengan enzimas colagenasa e incube durante el tiempo adecuado. Las colagenasas descomponen el tejido conectivo que rodea cada fibra muscular o miofibra dentro del músculo. Este paso de digestión afloja las miofibras de la capa interna del músculo.
Después de la incubación, transfiera cuidadosamente el músculo digerido a una placa de pocillos múltiples que contenga medios precalentados para aumentar la tasa de supervivencia de las miofibras. Transfiera la placa a la platina calentada de un microscopio estereoscópico. Ahora, triture suavemente el músculo digerido para disociar y liberar las miofibras individuales en la solución.
Las miofibras EDL aisladas se pueden utilizar para análisis posteriores posteriores.
Rocíe todo el equipo y las extremidades traseras del ratón con etanol al 70%. Use tijeras endurecidas de curvas finas y fórceps finos para quitar la piel y exponer los músculos subyacentes. Retire la fascia circundante con las pinzas finamente curvadas sin dañar los músculos subyacentes.
Para extirpar el tibial anterior o TA, agarre el tendón TA distal con fórceps y córtelo con unas tijeras finas. Mientras sostiene el TA en el tendón, tire de él hacia la rodilla y corte el músculo cerca de la rodilla para exponer el músculo EDL.
Levante el tendón EDL distal con pinzas curvas y corte con unas finas tijeras de resorte Vannas. Exponga el tendón EDL proximal tirando con cuidado de EDL hacia la rodilla. Luego, corte el tendón proximal con unas tijeras. Incube los músculos EDL en el tubo de reacción a 37 grados Celsius en un baño de agua circulante. Detenga la digestión cuando los músculos se aflojen y se vean miofibras individuales.
Trabajando bajo un microscopio binocular estereoscópico, equipado con una placa calefactora, enjuague los músculos con medio de aislamiento tibio, utilizando la pipeta de gran diámetro. Disociar los músculos con la pipeta de gran diámetro, hasta que el número deseado de miofibras flote libremente en la solución.