Modelo de ratón con endoftalmitis bacteriana: un método para generar endoftalmitis bacteriana mediante la inyección intravítrea de suspensión bacteriana en el ojo de un ratón

La endoftalmitis bacteriana es una infección ocular inflamatoria debida a la invasión intraocular de la bacteria Bacillus cereus.

Para generar endoftalmitis bacteriana en un modelo de ratón, coloque un ratón anestesiado lateralmente en la tabla de cirugía. Sujete la piel periocular para desplazar el globo ocular y localizar la región del limbo, un punto de intersección de la esclerótica y la córnea en el ojo.

Tome una aguja precargada con la suspensión de cultivo de Bacillus cereus. Inserte la aguja en el limbo y perfore la región vítrea media. A continuación, inyecte la suspensión bacteriana por vía intravítrea, liberando las bacterias en la cavidad vítrea del ojo.

Ahora, retire la aguja y deje que el globo ocular recupere su posición natural. Transfiera el ratón a una jaula y controle la propagación de la infección bacteriana. Una vez dentro, las bacterias se replican rápidamente para aumentar en número. Posteriormente, estas bacterias utilizan sus flagelos para migrar hacia la retina.

Al llegar al espacio vitreorretiniano, las bacterias secretan toxinas y enzimas, que les ayudan a invadir la retina. Dentro de la retina, las proteínas de la envoltura bacteriana activan las células de Muller de la retina, produciendo mediadores inflamatorios para reclutar células inflamatorias que dañan las delicadas células de la retina. Eventualmente, una afluencia de células inflamatorias en el interior del ojo causa endoftalmitis en el ojo del ratón.

Para la inyección intravítrea, encienda el microinyector y abra la válvula de gas en el tanque de aire comprimido conectado al microinyector. Presione 'Modo' en el inyector hasta que la pantalla muestre 'Balance'. Presione 'Balance' y coloque el mouse de la computadora en la mesa de operaciones. Conecte el soporte de la pipeta de acero inoxidable al tubo conectado al "Llenado/Salida" del inyector y atornille firmemente el conector del soporte de la pipeta alrededor de una aguja de punta de pipeta capilar de vidrio biselado para permitir la inserción de la aguja capilar en el otro extremo del soporte de la pipeta.

Encienda el microscopio oftálmico y ajuste la intensidad de la luz al 50%. Coloque el microscopio sobre el lado del procedimiento y ajuste el microscopio al enfoque deseado. Después de confirmar una falta de respuesta al reflujo del pedal, coloque el ratón anestesiado sobre su lado izquierdo sobre las almohadillas médicas con la nariz apuntando hacia la derecha.

Localice el ojo derecho a través del objetivo del microscopio oftálmico y coloque las pinzas de un fórceps de acción inversa a cada lado del ojo para exponer el lugar de la inyección. Haga clic con el botón izquierdo del mouse conectado al microinyector para llenar la aguja capilar preparada con la solución bacteriana diluida y, asegurando la cabeza con la mano izquierda, coloque la punta de la aguja, con el lado biselado hacia arriba en el limbo del ojo.

Con la aguja en un ángulo de 45 grados, perfore el ojo, teniendo cuidado de que solo se inserten 0,5 milímetros de la punta afilada de la aguja. Una vez que se haya insertado la punta de la aguja, use la mano izquierda para hacer clic derecho en la alfombrilla del mouse para inyectar 0.5 microlitros de la solución de B. cereus. Para evitar fugas, deje la punta de la aguja dentro del ojo del mouse durante 2 a 3 segundos antes de retirarla. Luego, suelte las pinzas y el ojo volverá a la cuenca por sí mismo. Transfiera el ratón a una jaula de recuperación en una almohadilla térmica con monitoreo hasta que esté completamente reclinado.