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Biología
0 vistas • 3:37 min • July 8th, 2025
El cerebro de los vertebrados contiene un sistema especializado de intercambio de fluidos análogo al sistema linfático, llamado sistema glinfático. En este sistema, el líquido cefalorraquídeo o LCR ingresa a los espacios periarteriales, lo que permite el intercambio de solutos a través de canales especializados presentes en los extremos astrocíticos. El LCR portador de solutos fluye hacia el espacio perivenoso para eliminar los solutos del cerebro. Esta vía es importante para la fisiología del cerebro y se puede visualizar utilizando moléculas trazadoras fluorescentes.
Para comenzar, prepare un cerdo anestesiado en posición prona con la cabeza flexionada hacia arriba. Haga una incisión debajo de la cresta occipital. Retraiga los músculos para exponer la cisterna magna, una abertura en el espacio subaracnoideo entre el cerebelo y el bulbo raquídeo.
Inserte con cuidado una cánula a través de la duramadre en la cisterna magna. Aplica pegamento dental alrededor de la cánula. Deja que se endurezca. A continuación, inyecte moléculas trazadoras fluorescentes suspendidas en LCR artificial a una velocidad adecuada. Una solución trazadora visiblemente pulsante en la base de la cánula confirma la entrega exitosa.
Después de la inyección, reposicione las capas de tejido y sutura la incisión. Coloque una gasa de algodón húmeda sobre la incisión para limitar la pérdida de calor. Deje que las moléculas trazadoras circulen durante el período deseado. Cuando se visualizan bajo un microscopio de fluorescencia, las moléculas trazadoras ayudan a visualizar la distribución del LCR en el sistema glinfático.
Asegúrese de que una persona eleve y flexione la cabeza y el cuello del animal, mientras que la otra palpa la cisterna magna, tomando nota de su ubicación anatómica. Introducir una cánula de calibre 22 lenta y cuidadosamente en la cisterna magna a través de la duramadre, en un ángulo oblicuo al eje longitudinal. Luego, retraiga la aguja de la cánula y coloque una tapa en la cerradura.
Comience aplicando superpegamento y un acelerador donde la cánula ingresa al tejido. Luego, aplique el cemento dental. Espere cinco minutos para que el cemento se endurezca. Retire la tapa con cuidado de la cánula. Conecte la cánula al extremo macho del grifo de la vía intravenosa con el trazador usando una extensión de 10 centímetros.
Inyecte el marcador lentamente a una velocidad de 100 microlitros por minuto, ya sea a mano o con una bomba de microinfusión. Retire el grifo de la vía intravenosa y reemplácelo con la tapa. Compruebe si el marcador es visible, pulsando en la base de la cánula. Luego, coloque sacos de arena debajo del cuello del animal para mantener algo de flexión.
Suelte la cabeza y deje al animal en posición de reposo y boca abajo. Suelte los retractores de retención automática y reemplace los músculos. Use las pinzas de toalla quirúrgica para unir la piel sobre los músculos. Primero use una gasa y luego, una manta para cubrir las pinzas de la toalla y la incisión para limitar la pérdida de calor. Deje que el marcador circule durante el tiempo deseado.