JoVE Encyclopedia of Experiments
Biología
0 vistas • 2:57 min • July 8th, 2025
El ojo porcino contiene una población de células epiteliales cuboidales que contienen numerosos melanosomas, orgánulos que ayudan en la absorción de la luz, lo que da como resultado la apariencia pigmentada de estas células. Dependiendo de la ubicación de estas células, las células epiteliales presentes debajo de la retina se denominan células epiteliales pigmentarias de la retina o células EPR, y las que recubren el iris se conocen como células epiteliales pigmentarias del iris o células IPE.
Para aislar las células del EPR y el EPI, comience tomando un ojo porcino. Sumerja el ojo en una solución desinfectante adecuada para eliminar cualquier microbio adherido a la superficie del ojo.
Retire el ojo de la solución desinfectante y use una aguja para hacer una pequeña incisión cerca del iris. Use esta abertura para hacer un corte circunferencial completo a lo largo del límite del iris. Esto separa el segmento anterior del ojo que contiene el iris del bulbo posterior del ojo, que tiene la retina. Retire la porción sobrante y transfiera el iris y el bulbo del ojo a placas de cultivo separadas.
Agregue un medio de cultivo adecuado en la placa que contiene iris y en el bulbo del ojo. Raspa el pañuelo. La fuerza mecánica afloja las células epiteliales, liberándolas en el medio. Aspirar las células IPE y RPE desprendidas. Sembréelos en placas de cultivo separadas e incube hasta su uso posterior.
Limpie el tejido muscular y la piel restantes de los ojos, desinfecte los ojos en una solución a base de yodo y enjuáguelos con PBS.
Para aislar las células IPE, retire el cristalino y saque el iris, como se demostró. Después de preparar dos lirios, agregue 1 mililitro de medio completo y aísle las células rascando con una pipeta Pasteur plana pulida al fuego, luego cuente y siembre las células. Coloque la placa en la incubadora.
Para aislar las células del EPR, retire el vítreo y la retina del segmento posterior y coloque el bulbo en una placa de Petri. Llene la bombilla con 1 mililitro de medio completo. Con una pipeta Pasteur curvada pulida al fuego, retire las células del EPR, recoja la suspensión celular dentro de la bombilla con una pipeta de 1.000 microlitros y transfiérala a un tubo de 1,5 mililitros para su resuspensión. Luego, cuente y siembre las células e incube la placa como se demostró anteriormente.