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Biología
0 vistas • 3:29 min • July 8th, 2025
Prepare un lecho de polvo de etileno propileno fluorado, o FEP, en una placa de cultivo. Agregue una gota de medio de maduración que contenga complejos cúmulo-ovocitario, o AOC, sobre el polvo de FEP. Pase suavemente la gota sobre el polvo para formar una canica líquida o LM. El polvo de FEP crea una capa porosa hidrofóbica, lo que permite el intercambio de gases entre el líquido interior y el entorno circundante.
Ahora, recoja la unidad LM y transfiérala al pozo central de una placa de Petri de FIV. Agregue agua estéril al anillo exterior para mantener hidratados los AOC. Luego, incube el LM en condiciones fisiológicas para permitir la maduración de los ovocitos.
A continuación, retire el medio gastado y agregue un medio de maduración fresco. El contacto directo con el líquido interrumpe la capa hidrofóbica de FEP y rompe el LM para liberar los AOC. Transfiera los AOC liberados a un nuevo plato que contenga una gota fresca de medio de maduración y lávelos para eliminar las partículas de FEP.
Después del lavado, transfiera los AOC y el medio fresco al lecho de polvo FEP. Enrolle la gota para cubrirla con polvo. Finalmente, transfiera el LM a la placa de Petri de FIV. Los LM con recubrimiento en polvo FEP mantienen la estructura 3D de los ovocitos y mejoran su viabilidad.
Haga una cama de 5 gramos de polvo de FEP en una placa de Petri de 30 milímetros. Distribuya una sola gota de medio de maduración, que contenga de 3 a 5 AOC sobre el polvo de FEP. Gire la placa suavemente con un movimiento circular para asegurarse de que las partículas cubran completamente la superficie de la gota líquida y formen canicas líquidas o LM.
Prepare varias placas de Petri de FIV de 60 milímetros y agregue de 3 a 4 mililitros de agua estéril a los anillos exteriores para crear una cámara de humedad. Recoge el LM formado con una pipeta de 1.000 microlitros y colócalo en el pocillo central. Incube las canicas durante cuatro días a 38 grados centígrados en una incubadora de dióxido de carbono al 5%.
Para cambiar el medio, aplique 30 microlitros de medio de maduración en cada LM, lo que hará que se extienda. Cuando el contenido de mármol se disuelva, transfiera los AOC liberados del biorreactor a una gota de medio de maduración fresco en la placa de Petri. Después de 3 a 4 lavados en medio de maduración, transfiera los AOC junto con 30 microlitros de medio fresco, al lecho de polvo de FEP.
Gire suavemente la placa con un movimiento circular para asegurarse de que las partículas de polvo cubran completamente la superficie de la gota de líquido y formen un nuevo LM. Luego, transfiera el LM a la placa de Petri de FIV.