0 visualizaciones • 4:11 min. • July 8th, 2025
La capa más interna de la córnea porcina, la porción transparente del ojo frontal avascular, consiste en células endoteliales corneales, o CEC, sostenidas por la membrana basal, la membrana de Descemet o DM. Las CEC mantienen la transparencia corneal y una visión óptima. Cualquier daño en ellos podría afectar la visión.
Para el daño selectivo de la CIC, comience con un ojo porcino recién cosechado en un medio adecuado. Retire los tejidos circundantes. Trate el ojo con un desinfectante adecuado para eliminar la contaminación microbiana de la superficie. Después del lavado con solución salina, examine ópticamente el ojo anterior para descartar cualquier anomalía antes de la irradiación con láser.
Asegure el ojo en un aparato de sujeción personalizado frente a una unidad de lámpara de hendidura equipada con un láser de una longitud de onda específica. Visualice las capas corneales individuales. Con la energía láser adecuada y la posición del punto de enfoque, dirija los pulsos láser a la capa endotelial corneal. Los pulsos focalizados de corta duración y alta potencia provocan la ruptura selectiva de la CIC de la superficie expuesta al tiempo que evitan la difusión del calor, protegiendo así la DM o el tejido estromal.
Creando un puerto de entrada cerca del limbo, la unión corneoescleral, inyecte una solución viscoelástica en la cámara anterior que contiene la córnea para estabilizarla y proteger las CEC restantes. Extirpe y transfiera el segmento corneal tratado con láser a una placa de pocillos múltiples que contenga medios, con el lado de la CIC hacia arriba. El modelo de lesión del endotelio corneal ex vivo se puede utilizar para estudios adicionales.
Después de obtener los ojos porcinos recién enucleados del matadero local, colocar las muestras a 4 grados centígrados, a medio completo. Use tijeras para eliminar los tejidos extracelulares y sumerja los ojos en una solución oftálmica de povidona yodada al 5% durante cinco minutos. A continuación, coloque las muestras desinfectadas en PBS estéril a temperatura ambiente.
Usando un dispositivo de tomografía de coherencia óptica de dominio espectral, examine los ojos en busca de patologías importantes del segmento anterior, como cicatrices corneales, edema y otras opacidades. Después de la detección, coloque los ojos frente a una unidad de lámpara de hendidura equipada con un láser Nd: YAG con una longitud de onda de 1064 nanómetros y un diámetro de punto focal de 10 micrómetros en el aire. Seleccione el aumento de 12X y desvíe la iluminación para visualizar las capas corneales individuales.
Después de ajustar la energía del pulso y el punto de enfoque a los parámetros apropiados para la ablación selectiva de las células endoteliales corneales, aplique varios disparos de láser al tejido. Luego, bajo un microscopio de disección, coloque una paracentesis de córnea transparente cerca del limbo e inyecte viscoelástica para estabilizar la cámara interior. Luego, use una trefina de 8 milímetros para extirpar la córnea central tratada con láser y coloque la córnea aislada en un pocillo de una placa de 12 pocillos, con el lado endotelial hacia arriba. Cuando se hayan recolectado todas las córneas, agregue 3 mililitros de medio completo a cada pocillo de muestra e incube las muestras hasta por tres días a 37 grados Celsius.