Aislamiento de células endoteliales aórticas porcinas (pAEC): un método basado en enzimas para aislar células endoteliales de aorta abdominal porcina recolectada

La aorta, la arteria principal que transporta sangre oxigenada desde el corazón hasta el cuerpo, está compuesta por tres capas o "túnicas": una íntima interna, una media media y una adventicia externa. Las células endoteliales o CE están presentes en la íntima como una monocapa delgada y continua sobre una membrana basal de soporte que consta de proteínas estructurales, principalmente colágeno.

Para aislar las AE, comience con una aorta porcina cosechada en una placa de cultivo. Extirpe sus extremos y cualquier tejido adherente circundante para evitar la contaminación de células no endoteliales. Lave la aorta con un tampón que contenga antibióticos para inhibir el crecimiento microbiano.

Pase una sutura quirúrgica estéril a través de la aorta y ate uno de sus extremos, manteniendo la sutura dentro de la luz. Asegure el extremo atado y retraiga la sutura para invertir la aorta por completo. Esto expone la íntima que contiene CE a la digestión enzimática. Trate la aorta con una solución de colagenasa precalentada y de baja concentración para una actividad enzimática óptima e incube.

La colagenasa descompone las proteínas de colágeno presentes en la membrana basal subyacente a las CE,