Microinyección de embriones de mosquitos: una técnica para introducir ADN exógeno en la yema del embrión de Anopheles gambiae para generar mutaciones de la línea germinal

Para microinyectar ADN exógeno en el embrión de Anopheles, tome la cantidad deseada de huevos de mosquito pre-blastodermo recién cosechados. En esta etapa temprana de desarrollo, el óvulo contiene núcleos sin formar estructuras celulares.

Coloque los huevos en forma de bote en la periferia de un papel secante húmedo presente en la superficie de un portaobjetos de vidrio. Este paso asegura una hidratación adecuada del embrión para facilitar la inyección en los pasos posteriores. Alinee los huevos adyacentes entre sí con su superficie ventral expuesta hacia afuera.

Ahora, tome una aguja de microinyección de calibre estrecho que contenga la solución plásmida deseada. Use un microscopio de disección para colocar la aguja cerca del polo posterior del óvulo, un sitio para los precursores de células germinales. Inserte la aguja en un ángulo apropiado para que perfore el exocorion, la capa externa, y el endocorion, una capa interna de la cáscara del huevo, que finalmente llegue al embrión.

Inyecte la mezcla de plásmidos en la yema del embrión. Retraiga suavemente la aguja y deje que los huevos crezcan en condiciones adecuadas. A medida que el óvulo crece, algunos núcleos migran al polo pos