Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Técnicas biológicas
0 visualizaciones • 3:48 min. • July 8th, 2025
Para realizar la transferencia hidrodinámica de genes, comience tomando una jeringa llena de una solución salina que contenga plásmidos recombinantes que transporten el gen de interés. Posteriormente, tome un modelo de ratón e inyecte rápidamente un gran volumen de solución plásmida en la base de la cola, asegurándose de que la solución plásmida se inyecte por vía intravenosa en la vena de la cola.
La inyección presurizada de un alto volumen de plásmidos genera una fuerza mecánica llamada fuerza hidrodinámica, que aumenta la presión intravascular en la vena cava inferior, una vena que transporta sangre desoxigenada al corazón.
Un gran volumen de líquido induce congestión en el ventrículo derecho del corazón, lo que obliga a invertir la dirección de la sangre. Este paso obliga a la solución plasmídica a ingresar a la vena hepática, que la lleva al hígado.
Los plásmidos se mueven dentro de los sinusoides hepáticos, los espacios en el hígado revestidos por las células endoteliales. El aumento del volumen sanguíneo ayuda a los plásmidos a permeabilizar la capa endotelial, ayudándolos a llegar cerca de los hepatocitos circundantes, las células hepáticas.
La rápida entrada de solución plasmídica induce presión sobre la membrana celular de los hepatocitos generando poros transitorios. Estos poros facilitan la absorción del ADN plasmídico por parte de las células. Más tarde, los poros de la membrana se cierran, atrapando los plásmidos dentro de los hepatocitos.
La expresión exitosa del gen de interés en los hepatocitos confirma la transfección.
Comience pesando los ratones, luego, prepare una solución salina estéril que contenga 15 microgramos por mililitro de construcción vectorial de la bella durmiente sin endotoxinas salinas y 1 microgramo por mililitro de pc-HSB5 sin endotoxinas. Prepare suficiente solución para inyectar a cada ratón un volumen que sea el 10% de su peso corporal. Llene una jeringa estéril de 3 mililitros con el volumen requerido para un ratón y coloque una aguja de calibre 27.
Después de agregar una cantidad adecuada de papel de seda para dejar un espacio mínimo para el movimiento, pero suficiente espacio para respirar, inserte el mouse en un dispositivo de retención apropiado con orificios para respirar. Caliente la cola con una lámpara infrarroja durante 30 a 60 segundos, mientras observa cuidadosamente los signos de sobrecalentamiento, como el movimiento rápido de la cola u otros signos de agitación, luego, limpie la cola con un hisopo con alcohol.
Inserte la aguja casi horizontalmente en cualquiera de las dos venas laterales de la cola cerca de la base de la cola. Si se coloca con éxito, una pequeña cantidad de sangre puede fluir de regreso al cono de la aguja. Inyecte el volumen total en la vena de la cola dentro de 8 a 10 segundos. Después de la inyección, retire inmediatamente el ratón del inmovilizador. Comprima la herida de inyección con una gasa estéril durante al menos 30 segundos o hasta que disminuya el sangrado.
La inyección hidrodinámica exitosa de la vena de la cola es crucial para la transfección y depende especialmente de la velocidad, el volumen y el tiempo de inyección. Para facilitar la inyección intravenosa, asegúrese de que los ratones no estén estresados o deshidratados el día de la inyección.
Después de 30 a 60 minutos de alojamiento en solitario en una jaula de recuperación, transfiera al ratón de regreso a su jaula original.