Nucleofección de formas de parásitos: un método de transfección basado en electroporación para administrar plásmidos codificantes de proteínas fluorescentes en el núcleo de esporozoíto

Para administrar plásmidos en núcleos de esporozoítos por nucleofección, comience con una suspensión de esporozoítos aislados y viables (etapa móvil e infecciosa de los parásitos) en tampón. Los esporozoítos son células de forma delgada encerradas por una membrana plasmática externa y un complejo de membrana interna subyacente que consta de una serie de vesículas aplanadas y proteínas críticas para la estabilidad estructural y la motilidad.

Centrifugar la suspensión para peletizar los esporozoítos. Vuelva a suspender el sedimento de esporozoíto en un volumen adecuado de tampón de transfección nuclear, complementado con plásmidos fluorescentes que codifican proteínas. El tampón de transfección nuclear con alta capacidad de amortiguación y fuerza iónica garantiza una transfección eficiente al tiempo que preserva la funcionalidad del esporozoíto.

Transfiera la suspensión a una cubeta de transfección nuclear. Coloque la cubeta en el soporte de un dispositivo de nucleofección. Ejecute el programa de nucleofección adecuado.

Durante la nucleofección, aplicada específicamente, los pulsos cortos de alto voltaje, junto con los componentes tampón, interrumpen temporalmente la membrana plasmát