Inyección de perivitelina basada en vectores lentivirales: un método para transducir el gen de interés en ovocitos de ratón unicelulares fertilizados
Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Técnicas biológicas
0 visualizaciones • 4:16 min. • July 8th, 2025
Para realizar la transfección, tome una cámara especializada que contenga huevos de ratón recién fertilizados suspendidos en una gota de medios apropiados. En esta etapa, el óvulo contiene un gran ovocito central que contiene los pronúcleos paterno y materno.
El ovocito está cubierto por una zona pelúcida rica en glicoproteínas, rodeada de grupos de células cúmulos estrechamente dispuestas incrustadas dentro de la matriz extracelular rica en ácido hialurónico. Ahora, trata los huevos con la enzima hialuronidasa, que digiere el ácido hialurónico. Esto disocia las células del cúmulo, eventualmente exponiendo la zona pelúcida que rodea al ovocito.
Coloque un solo ovocito tratado cerca de la punta de una pipeta de retención y aplique presión de succión para restringir su posición. Tome una aguja de microinyección de calibre estrecho que contiene una suspensión de vector lentiviral diseñada que lleva un transgén encapsulado dentro de la envoltura viral. Estos retrovirus tienen la capacidad inherente de integrarse en el genoma del huésped.
A continuación, perfore la aguja a través de la zona pelúcida para llegar al espacio perivitelino, un espacio entre la zona pelúcida más externa y la
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