Tinción de von Kossa de células de músculo liso vascular aórtico: una técnica in vitro para la evaluación de la calcificación de la capa medial arterial

Las células del músculo liso vascular, o CMLV, son los componentes celulares prominentes en la túnica media, la capa media de la pared del vaso sanguíneo. En respuesta a señales patológicas o envejecimiento, estas células median la calcificación vascular, un fenómeno de acumulación de calcio en la matriz extracelular.

Tome una placa de pocillos múltiples que contenga una capa adherente de cultivo de CMLV aórtica murina precalcificada. Incube las células con una solución de formalina para reticular las proteínas celulares y estabilice la estructura de las CMLV antes de la tinción.

Comience la tinción de von Kossa aspirando formalina del pocillo y agregando una solución de nitrato de plata. Incube la placa bajo una fuente de luz adecuada.

Una vez que la solución de nitrato de plata llega a los sitios de calcificación en la matriz extracelular de la capa VSMC, los iones de plata reemplazan a los iones de calcio unidos al fosfato. Esto da como resultado una coloración amarilla transitoria. En presencia de materia orgánica y luz, la degradación fotoquímica del fosfato de plata da como resultado la formación de plata metálica de color negro.

Deseche la cantidad máxima de solución de nitr