Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Técnicas biológicas
0 visualizaciones • 3:14 min. • July 8th, 2025
Para la tinción específica del citoplasma celular en microambientes de tejidos blandos, obtenga un riñón de ratón recién recolectado. Trátelo con una solución fijadora que contenga formaldehído, ácido acético glacial y metanol. Incubar a bajas temperaturas.
El formaldehído penetra en las células, entrecruzando proteínas con proteínas y proteínas con ácidos nucleicos. El metanol desplaza el agua del tejido y coagula las proteínas. El ácido acético causa acidificación intracelular e hinchazón de los tejidos, contrarrestando así la contracción del tejido causada por el metanol.
La fijación inactiva las enzimas y estabiliza la morfología del tejido para su posterior tinción. Retire el exceso de fijadores con tampón. Incuba el tejido con eosina Y, un colorante ácido.
La eosina penetra en las células fijas y entra en el citoplasma. El ambiente ácido del citoplasma, del tratamiento con ácido acético, provoca la máxima protonación de grupos amino de proteínas citoplasmáticas.
La eosina, con grupos funcionales cargados negativamente, interactúa electrostáticamente con grupos protonados de proteínas, formando un complejo colorante-proteína estable, y tiñe el citoplasma de rosa al acumularse.
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