Tinción con azul de metileno para evaluar la formación de colonias metastásicas in vitro: un procedimiento de tinción para evaluar la metástasis mediante la cuantificación de células cancerosas recolectadas a partir de un modelo de ratón canceroso

Durante la metástasis del cáncer, las células tumorales de un tumor primario viajan a través del sistema circulatorio, se extravasan a órganos distantes y establecen tumores secundarios.

Para evaluar la metástasis pulmonar en un modelo de ratón de cáncer de mama al que se le han inyectado células 4T1, células de cáncer de mama altamente metastásicas, prepare una suspensión celular, incluidas las células 4T1, aisladas de los pulmones recolectados. Centrifugar la suspensión y volver a suspender las células en medios que contengan 6-tioguanina, 6-TG, un análogo de la guanina. Siembre la suspensión celular en una placa de cultivo.

6TG ingresa a las células normales donde la enzima transferasa específica lo convierte en nucleótido 6-TG, un nucleótido tóxico. Estos nucleótidos citotóxicos se incorporan al ADN, causando daño al ADN, y eliminan selectivamente las células del cultivo. Las células 4T1 tienen una capacidad disminuida para formar nucleótidos tóxicos, lo que facilita su supervivencia y adherencia a la placa. Dependiendo de la capacidad proliferativa de las células, forman colonias.

Trate las células con metanol. El metanol permeabiliza las células y desnaturaliza las proteínas