JoVE Encyclopedia of Experiments
Técnicas biológicas
0 vistas • 2:27 min • July 8th, 2025
Para la tinción del cartílago, comience con una sección de cartílago fijada en formol e incrustada en parafina de un ratón sacrificado.
Primero, sumerja la muestra en el sustituto del xileno, un agente de limpieza no peligroso que elimina la cera de parafina y expone el tejido deshidratado. A continuación, trate la muestra con concentraciones decrecientes de etanol para rehidratar el tejido para su posterior tinción.
Ahora, tiñe la muestra con hematoxilina de hierro de Weigert, una tinción orgánica que contiene iones ferrosos, e incube brevemente. Las moléculas de hematoxilina forman complejos con iones ferrosos y penetran en la célula. Los iones ferrosos actúan como mordiente y facilitan la unión de la hematoxilina a los ácidos nucleicos, impartiéndoles un color azul.
Luego, trate la muestra con el tinte verde rápido, una contratinción que se une al tejido conectivo e imparte un color verde. A continuación, trate la muestra con una solución de ácido acético para estabilizar las moléculas de colorante. Por último, tiña la muestra con safranina-naranja -un colorante catiónico- e incuba.
Las moléculas de safranina cargadas positivamente migran hacia los proteoglicanos cargados negativamente en el cartílago y se unen a ellos, impartiendo un color rojo. Posteriormente, monte el portaobjetos en un medio de resina y visualícelo bajo un microscopio.
El cartílago sano aparece intensamente rojo debido a la matriz extracelular rica en proteoglicanos, mientras que el cartílago no saludable aparece menos rojo con signos de daño tisular.
Para realizar la tinción con Safranina-O, primero desparafina los portaobjetos en oxileno durante tres a cinco minutos, repitiendo el baño de oxileno dos veces. Luego, hidrate los portaobjetos en un gradiente de etanol, terminando con agua destilada. A continuación, coloque los portaobjetos a través de la solución de hematoxilina de hierro de Weigert, una solución Fast Green al 0,05 %, una solución de ácido acético al 1 % y una solución de safranina-O al 0,1 %. Ahora, monte los portaobjetos con un medio resinoso.