Tinción con fosfatasa ácida resistente al tartrato: una técnica in vitro para detectar osteoclastos cultivados que contienen la enzima TRAP
Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Técnicas biológicas
0 visualizaciones • 3:08 min. • July 8th, 2025
Los osteoclastos son células grandes, en forma de cúpula y multinucleadas que se encuentran en la superficie ósea. Estas células contienen numerosos gránulos citoplasmáticos ricos en fosfatasa ácida resistente al tartrato, o TRAP, una enzima metaloproteica secretada desde el borde ondulado de los osteoclastos hacia el tejido óseo. Esta enzima digiere la matriz extracelular y disuelve los cristales minerales, facilitando la reabsorción ósea.
Para detectar los gránulos de TRAP como marcadores citoquímicos de osteoclastos, tome una placa de cultivo que contenga osteoclastos adherentes. Agregue la solución de tinción TRAP a las células. Esta solución comprende el sustrato: un derivado de naftol que contiene fosfato y ácido tartárico en un tampón complementado con una sal de diazonio.
Agregue ácido acético a esta solución para mantener el pH ácido necesario para la tinción TRAP. Incube las células en la oscuridad a temperatura fisiológica para una actividad óptima de la enzima TRAP.
La solución de tinción ingresa a los osteoclastos, donde el ácido tartárico inhibe la actividad hidrolizante de las fosfatasas ácidas sensibles al tartrato en otras células.
Al mismo tiempo, TRAP hidroliza e
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