Tinción con rojo de alizarina: una técnica para visualizar la mineralización por osteoblastos cultivados

Los osteoblastos son células formadoras de hueso que secretan pequeñas vesículas en su matriz extracelular, ECM. Estas vesículas, llamadas vesículas de matriz, están equipadas con transportadores de membrana y enzimas que permiten la entrada de iones de calcio y fosfato, formando cristales minerales en su interior. A medida que los cristales se acumulan, atraviesan la membrana de la vesícula para formar nódulos mineralizados en la ECM, formando la densidad mineral ósea.

Para visualizar la mineralización, comience con células osteoblásticas en un andamio biocompatible en un medio de crecimiento adecuado. Los osteoblastos se adhieren al andamio y utilizan factores de crecimiento del medio para secretar vesículas de matriz que posteriormente forman nódulos mineralizados en la MEC.

Aspire el medio de cultivo y enjuague las células para eliminar cualquier rastro de medio. Trate las células con una solución de formalina, que induce la reticulación, la fijación y la preservación de la estructura tisular de la ECM. Lave las celdas para eliminar cualquier resto de formalina.

A continuación, agregue la solución de tinción Alizarin Red e incube el cultivo. Las moléculas de colorante se unen a