Tinción de plata de glicosaminoglicanos sulfatados: un método de tinción para la visualización de glicosaminoglicanos sulfatados en geles de poliacrilamida

Los glicosaminoglicanos sulfatados, GAG, son polisacáridos lineales largos, cargados negativamente, con cadenas unitarias de disacáridos repetitivos sulfatadas en distintas posiciones, que existen en longitudes variables.

Para visualizar GAG sulfatados aislados de interés que difieren en la longitud de la cadena en un gel de poliacrilamida después de la electroforesis, retire con cuidado el gel de su casete. Enjuague con agua desionizada, eliminando las piezas de gel adheridas que puedan interferir con las manchas.

Tratar con una solución ácida de azul alcián. En condiciones ácidas, el azul alcián, un colorante catiónico polivalente con un átomo de cobre en el centro, interactúa específicamente con los GAG sulfatados cargados negativamente a través de interacciones iónicas, formando un complejo azul profundo insoluble en agua.

Lave el gel con agua desionizada y metanol, eliminando cualquier mancha residual. Incube el gel con una solución alcalina de nitrato de plata. En condiciones alcalinas, los GAG sulfatados unidos al azul alcián proporcionan sitios para que los iones de plata cargados positivamente se unan y formen complejos.

Trate el gel en una solución reveladora que contenga