Ensayo de tinción de Giemsa para la formación de colonias: un procedimiento de tinción in vitro para evaluar la capacidad proliferativa de las células madre mesenquimales

Los ensayos de formación de colonias miden la capacidad proliferativa de las células para convertirse en colonias.

Primero, semilla de suspensión celular derivada de médula ósea que comprende eritrocitos y células mononucleares, incluidas las células madre mesenquimales o MSC, en medios en una placa de cultivo e incuba. Las MSC se adhieren al fondo de la placa, mientras que los eritrocitos y las células mononucleares permanecen en suspensión y se descartan.

Agregue medios nuevos que contengan factores de crecimiento para apoyar la supervivencia de MSC. Dependiendo de su potencial proliferativo individual, las MSC se replican para formar colonias.

A continuación, trate las colonias con metanol. El metanol permeabiliza las células, desplaza el agua del entorno intracelular y desnaturaliza las proteínas, preservando la arquitectura celular.

Incube las colonias fijas con la solución de tinción Giemsa, una mezcla de productos de oxidación de azul de metileno, principalmente azul B, un colorante básico, y eosina Y, un colorante ácido. Tras la difusión en las células, los dímeros B azules cargados positivamente se unen mediante intercalación al ADN cargado negativamente en el núcleo, impa