Tinción con azul alcián para visualizar proteoglicanos: una técnica para detectar proteoglicanos en cultivo in vitro de condrocitos diferenciados con células madre mesenquimales

Los proteoglicanos están compuestos por una proteína central unida covalentemente a cadenas de glicosaminoglicanos sulfatados.

Para visualizar los proteoglicanos, comience con andamios a base de colágeno, el sustrato polimérico poroso, y siembre la suspensión de células madre mesenquimales, o MSC, en ellos. Esto proporciona soporte estructural a las MSC y les permite crecer tanto en la superficie como dentro de las cavidades de los andamios.

Tratar las construcciones en un medio de diferenciación condrogénico que contiene factores de crecimiento transformadores que impulsan la transformación de las MSC en condrocitos maduros: células cartilaginosas. Los condrocitos maduros secretan proteoglicanos que forman una red con el colágeno en el andamio.

Tome una sección preparada a partir de la construcción cargada de condrocitos. Agregue una solución ácida de tinción de azul alcián suplementada con clorhidrato de guanidio e incube. Durante la incubación, el clorhidrato de guanidina en la solución de colorante disocia cualquier agregado de proteoglicanos para una mejor tinción.

Posteriormente, los glicosaminoglicanos sulfatados cargados negativamente de los proteoglicanos se unen a las mol