Método de doble tinción: una técnica para visualizar las interacciones planta-hongo utilizando rojo de rutenio y azul de algodón con lactofenol

En la roya del café, las esporas de Hemileia vastatrix, un hongo patógeno, aterrizan en la superficie de la planta y desarrollan un tubo de germinación, iniciando así una infección a través de las hifas.

Estas hifas se extienden dentro del tejido e invaden las células vegetales a través de estructuras especializadas en forma de dedos llamadas haustorios, que absorben los nutrientes de las plantas. Los haustorios también secretan moléculas efectoras que son reconocidas por las proteínas de resistencia de la planta, lo que lleva a la encapsulación rica en pectina del haustorio para restringir la infección.

Para visualizar esta interacción, comience con una sección de hoja de café infectada, ultradelgada e incrustada en resina. Ahora, trate la muestra con lactofenol azul de algodón, una tinción histológica que comprende fenol, ácido láctico, glicerol y azul de algodón. Calienta el portaobjetos brevemente.

A medida que los componentes del colorante penetran en el tejido, el fenol elimina cualquier organismo vivo, mientras que el ácido láctico y el glicerol ayudan a preservar la arquitectura celular. Simultáneamente, las moléculas de azul algodón se unen a los restos de quitina en la pa