Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Técnicas biológicas
0 visualizaciones • 2:49 min. • July 8th, 2025
La fibrosis es un aumento de la deposición de colágeno fibrilar en la matriz extracelular del tejido dañado. Estructuralmente, comprende cadenas polipeptídicas de colágeno de triple hélice.
Para teñir el colágeno con tinte rojo picrosirius, tome una sección de tejido cardíaco fijada en paraformaldehído e incluida en parafina. Sumerja la sección de tejido en xileno, un solvente orgánico, para disolver la cera circundante.
Tratar secuencialmente el tejido desparafinado con concentraciones decrecientes de alcohol para reemplazar el xileno. Sumerja el tejido en agua para rehidratarlo y una mejor visualización de las manchas en los pasos posteriores.
Sumerja el tejido en una solución roja de picrosirius que contenga rojo Sirius, un colorante azoico aniónico, y ácido pícrico.
El rojo Sirius contiene grupos sulfónicos ácidos que interactúan con los grupos amino básicos de lisina, hidroxilisina y arginina presentes en el colágeno. El ácido pícrico ayuda a mantener el pH ácido, facilitando la unión de las moléculas de colorante en una orientación paralela con el colágeno.
Enjuague los portaobjetos en una solución decolorante acidificada para eliminar el exceso de mancha. Coloque una gota de medio de montaje en el portaobjetos y véalo bajo un microscopio de campo claro.
El área fibrótica que contiene colágeno aparece de color rojo brillante en comparación con las regiones no fibróticas de color amarillo.
Después de fijar el tejido cardíaco, colóquelo en un dispositivo de corte de tejido, córtelo en rodajas de 2 milímetros de grosor y coloque las secciones en un casete de inclusión.
Después de la inclusión de parafina y el seccionamiento adicional de acuerdo con el protocolo de texto, desparafina los portaobjetos colocándolos en un tanque con xileno durante 30 minutos. Luego, rehidrate el tejido en una serie de alcohol diluido secuencialmente, seguido de agua destilada.
A continuación, use una solución adecuada de rojo picrosirius para cubrir completamente las secciones de tejido e incube durante una hora. Luego, use una solución de ácido acético al 0,5% para enjuagar los portaobjetos dos veces y enjuague las muestras dos veces en alcohol absoluto.
Seque al aire las muestras y móntelas en resina sintética con un cubreobjetos. Luego, use luz visible bajo un microscopio con un aumento de 200X para obtener imágenes de los portaobjetos.