Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Técnicas biológicas
0 visualizaciones • 2:30 min. • July 8th, 2025
En las plantas, la lignina, un biopolímero complejo, generalmente se deposita en las paredes celulares de los tejidos para brindar soporte.
La lignificación se encuentra predominantemente en los engrosamientos secundarios de la pared celular de las células del xilema conductoras de agua, como vasos y fibras, y en las células extraxilares, como las fibras interfasciculares.
Estructuralmente, la lignina está compuesta por precursores de monolignol reticulados. Estos alcoholes aromáticos polimerizan, formando una estructura muy ramificada. Esta característica mejora la resistencia y rigidez de la planta.
Para visualizar la deposición de lignina mediante tinción de Wiesner, tome secciones transversales de tallo de dicotiledónea incrustadas en agarosa derivadas de la porción media o inferior de la planta. Agréguelos a un tubo de microcentrífuga que contenga un tampón adecuado.
Agregue la solución de tinción preparada, que contiene el floroglucinol acidificado y el etanol, a las secciones del tallo. Los alcoholes presentes en la lignina reaccionan con el floroglucinol y el etanol para producir un pigmento rosado. Esto da como resultado el desarrollo de una coloración rosada correspondiente a la deposición de lignina en las paredes celulares de células especializadas.
Ahora, transfiera la sección teñida a un portaobjetos microscópico. Coloque suavemente un cubreobjetos sobre la sección, evitando burbujas, para ayudar a visualizarla mejor. Visualiza las secciones bajo un microscopio óptico.
La coloración rosada en las células especializadas del xilema y las fibras interfasciculares en las secciones transversales del tallo confirman la presencia de lignina en estos tejidos.
Para la tinción con floroglucinol, transfiera las secciones del tallo a un tubo de microcentrífuga. Agregue 1 mililitro de la solución de floroglucinol al tubo y tápelo inmediatamente porque el ácido clorhídrico en la mancha de floroglucinol es altamente corrosivo. Mueva suavemente el tubo para asegurarse de que todas las secciones estén manchadas. Pipetea suavemente las secciones en una punta de pipeta cortada y en un portaobjetos de microscopio. Cubra las secciones con un cubreobjetos. Observe las secciones bajo iluminación de campo claro. La solución se seca en 5 a 10 minutos causando un deterioro de las muestras, por lo tanto, la imagen debe completarse dentro de ese período de tiempo.