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Técnicas biológicas
0 vistas • 2:44 min • July 8th, 2025
La lignina es un componente estructural importante en la pared celular de la planta. Es un polímero compuesto principalmente de alcoholes siringílicos, o unidades de S-lignina, y alcoholes guayacílicos, o unidades de G-lignina, y una población menor de alcoholes paracumarilo llamados unidades de H-lignina.
El contenido de S-lignina difiere en varios tejidos vegetales secundarios. Se encuentra principalmente en los vasos y fibras xilares y en las fibras interfasciculares, donde proporciona soporte estructural.
Para detectar la presencia de S-lignina, tome secciones transversales del tallo de dicotiledónea incrustadas en agarosa en un tubo. Trate las secciones del tallo secuencialmente con una solución de tinción de permanganato de potasio, seguida de ácido clorhídrico diluido y, finalmente, con hidróxido de amonio, una base débil.
Durante este tratamiento, la fracción de S-Lignina presente en la pared celular sufre una serie de cambios para finalmente generar un producto que aparece rojo.
La intensidad de la coloración roja es menor en las células del xilema debido a la presencia de menos S-lignina en comparación con las fibras interfasciculares, que aparecen de un rojo más profundo. Transfiera las secciones a un portaobjetos y visualícelas bajo un microscopio óptico.
La variación en la intensidad del rojo ayuda a comprender la proporción relativa de S-lignina en los tejidos vegetales lignificados.
Para la tinción de Maule, transfiera las secciones del tallo a un tubo de microcentrífuga. Agregue 1 mililitro de la solución de permanganato de potasio al 0,5% al tubo que contiene las secciones. Pipetear la solución de permanganato potásico al 0,5% hacia arriba y hacia abajo suavemente, preferiblemente, sin alterar las secciones.
Después de una incubación de 2 minutos y repetir el pipeteo, deje reposar el tubo de microcentrífuga hasta que todas las secciones se asienten. Con una pipeta de 1 mililitro, extraiga 700 microlitros de solución de permanganato de potasio al 0,5%. Agregue 700 microlitros de agua destilada para enjuagar el permanganato de potasio. Repita tres o cuatro veces o hasta que la solución de agua se mantenga clara.
Después de desechar el agua, agregue rápidamente 1 mililitro de ácido clorhídrico al 3% hasta que el color marrón oscuro se descargue de las secciones. Esto puede suceder dentro de 3 a 5 minutos o puede requerir dos lavados de 5 minutos cada uno. Pipetee toda la solución de ácido clorhídrico al 3% y agregue inmediatamente 1 mililitro de solución concentrada de hidróxido de amonio antes de obtener imágenes bajo iluminación de campo claro.