Tinción con blanco de calcoflúor: un método simple para la visualización de fluorescencia inducida por UV de depósitos de celulosa en las paredes celulares de secciones de tallo de plantas dicotiledóneas

En las células vegetales, la pared celular, una capa protectora especializada, rodea la membrana plasmática. La pared celular está compuesta predominantemente de celulosa, un polisacárido lineal y no ramificado de monómeros de glucosa unidos de extremo a extremo a través de enlaces glucosídicos β-1, 4.

La celulosa existe en un estado agregado en forma de microfibrillas de celulosa dispuestas ortogonalmente, incrustadas en una matriz de hemicelulosa, pectina y proteína.

Ciertas células, como las del tejido del xilema vascular y las fibras interfasciculares, también incluyen lignina, un agente endurecedor, en sus paredes celulares.

Para visualizar la deposición de celulosa en las paredes celulares de las plantas, comience con secciones transversales incrustadas en agarosa de un tallo de planta dicotiledónea en tampón. Agregue una solución acuosa de blanco de calcofluor, un colorante plana quimiofluorescente. Incube para permitir que el tinte se difunda en el tejido.

Una vez dentro, el blanco de calcofluor a través de sus grupos funcionales hidroxilo interactúa y forma enlaces de hidrógeno con grupos hidroxilo de monómeros de glucosa en la celulosa. Esto acerca el colorante a la celulosa y favorece las interacciones adicionales de van der Waals, lo que lleva a un complejo estable de colorante y celulosa.

Transfiera las secciones del tallo a un portaobjetos de vidrio y monte un cubreobjetos. Bajo la iluminación de luz ultravioleta, las moléculas de tinte unidas a la celulosa emiten fluorescencia de color blanco brillante.

Las células de la epidermis, la corteza y la médula exhiben una fluorescencia intensa, con contornos de pared celular claramente delimitados, debido al alto contenido de celulosa. En comparación, las células del xilema y las fibras interfasciculares emiten fluorescencia tenuemente, lo que posiblemente sugiere una difusión inadecuada del tinte debido a la presencia de lignina.

Para la tinción de blanco de calcofluor, transfiera las secciones del tallo a un tubo de microcentrífuga y agregue un mililitro de la solución de blanco de calcofluor al 0,02%. Pipetea suavemente la solución hacia arriba y hacia abajo. Proceda a incubar y lave las secciones como se detalla en el protocolo de texto antes de observar las secciones bajo luz ultravioleta.