Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Técnicas biológicas
0 visualizaciones • 5:34 min. • July 8th, 2025
Para comenzar, tome una muestra que contenga oligonucleótidos de ARN fosforilados y no fosforilados marcados con fluorescencia mezclados con el colorante de carga que contiene urea. Calentar la muestra.
La urea, un fuerte desnaturalizante, en combinación con el calor desnaturaliza la estructura secundaria del ARN, lo que da como resultado su conformación linealizada y no estructurada. Ahora, moldee el gel mezclando una solución de acrilamida-bisacrilamida con urea.
Agregue tetrametileno diamina, un catalizador, y persulfato de amonio, un agente oxidante, para facilitar la polimerización posterior en gel.
Vierta la solución en un aparato de casete preensamblado. Inserte un peine, creando pocillos para la carga de muestras. Deje que el gel se polimerice. Coloque el casete en el aparato de gel. Agregue un amortiguador de funcionamiento a los depósitos superior e inferior, manteniendo el flujo de corriente a través de todo el gel. Retire el peine.
Cargue la muestra mezclada con tinte de visualización en el pocillo y conecte el gel a una fuente de alimentación al voltaje deseado. La urea en el gel permite que las moléculas de ARN migren como especies lineales.
El gel actúa como un tamiz
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