Electroforesis bidimensional semidesnaturalizante en gel de agarosa: una técnica para separar fibras de amiloide polimórficas en función de la heterogeneidad de tamaño

Las fibras amiloides son agregados de proteínas mal plegadas, que exhiben heterogeneidad de tamaño. Estas fibras, al ser resistentes a detergentes aniónicos como SDS, se pueden analizar mediante electroforesis bidimensional en gel de agarosa semidesnaturalizante.

Para comenzar, tome un gel de agarosa preensamblado del tamaño de un poro grande que contenga SDS. La alta porosidad permite la separación de fibras intactas durante la ejecución. Superponga el gel con un tampón de funcionamiento que contenga SDS.

Cargue un lisado celular que contenga fibras amiloides en el gel. La presencia de SDS y la ausencia de paso de calentamiento de la muestra crea condiciones semidesnaturalizantes en las que el detergente se une a amiloides altamente resistentes impartiendo una carga negativa uniforme a las fibras intactas.

Ejecute el gel en la primera dimensión al voltaje apropiado. El campo eléctrico provoca la migración de amiloides cargados negativamente hacia el ánodo cargado positivamente.

Durante la ejecución, las fibras más pequeñas migran rápidamente en comparación con las más grandes, formando un patrón de banda similar a una mancha que indica heterogeneidad de tamaño.

Al finalizar, gire