Electroforesis en gel de poliacrilamida nativa azul: una técnica de separación no desnaturalizante para el análisis de complejos de cadenas respiratorias mitocondriales intactos

Para analizar los cinco complejos mitocondriales de la cadena respiratoria con subunidades intactas, obtener complejos mitocondriales solubilizados en detergente suave no iónico. Mezclar con tampón que contenga Coomassie Blue-G, un colorante aniónico.

Coomassie reemplaza el detergente y se une de forma no específica a los complejos, impartiendo carga negativa y tiñéndolos de azul. Además, Coomassie evita que los complejos se agreguen y ayuda a preservar su estructura y función nativas.

En un tanque de electroforesis, ensamble un casete de gel que comprenda un gel de resolución de gradiente con tamaño de poro decreciente a lo largo de la longitud, superpuesto con gel de apilamiento del tamaño de un poro grande. Llene las cámaras de ánodo y cátodo con ánodo frío y tampón de cátodo que contiene Coomassie.

Cargue los pocillos con la mezcla de complejo de proteínas unidas a Coomassie. Iniciar electroforesis.

Los complejos proteicos cargados negativamente migran del gel de apilamiento al gel de resolución de gradiente, hacia el ánodo cargado positivamente. Mientras que los complejos más pequeños atraviesan rápidamente los poros, los complejos más grandes se ralentizan por los tamaños de