Electroforesis capilar: una técnica para analizar amplicones de reacción en cadena de la polimerasa marcados con fluorescencia

Para determinar el tamaño de los fragmentos de ADN mediante electroforesis capilar, comience tomando una placa de ensayo de pocillos múltiples. Cada pocillo contiene amplicones de PCR marcados con fluorescencia y de diferentes tamaños: oligonucleótidos de ADN bicatenarios obtenidos después de un ciclo de PCR.

Agregue algunos fragmentos de ADN de doble cadena de diferentes tamaños al pozo, que actúan como un estándar de tamaño. Cada una de estas moléculas de ADN lleva una etiqueta fluorescente para una fácil identificación.

Complemente el pozo con formamida, un desnaturalizante fuerte, y caliente a alta temperatura. Este paso desnaturaliza el ADN, formando fragmentos monocatenarios que pueden migrar fácilmente a través de los poros del gel.

Coloque la placa en una unidad analizadora de fragmentos que contenga gel de polímero preinyectado dentro de su sistema capilar.

Aplique un alto voltaje para introducir electrónicamente el ADN del pozo en el capilar de diámetro delgado en el cátodo, el extremo negativo. Las moléculas de ADN cargadas negativamente migran hacia el ánodo cargado positivamente. Las hebras de ADN más cortas enfrentan menos fuerza de fricción y se mueven más rápido a t