Electroforesis en gel alcalino de una sola célula: una técnica sensible para la estimación cuantitativa del daño en el ADN en células cancerosas individuales después de la quimioterapia

Los agentes quimioterapéuticos inducen roturas de ADN de cadena simple y doble en las células cancerosas, causando daño al ADN y muerte celular.

Para cuantificar el daño del ADN, mezcle las células cancerosas tratadas con quimioterapia con agarosa fundida de bajo punto de fusión. Pipetea esta mezcla en portaobjetos de vidrio prerrecubiertos de agarosa. Deje que la agarosa fundida se solidifique, incrustando las células dentro de la matriz de gel porosa.

Tratar con un tampón de lisis que contenga altas concentraciones de detergentes y sales. Los detergentes solubilizan las membranas celulares y nucleares. Además, el alto contenido de sal elimina las proteínas histonas del ADN, dejando el ADN superenrollado adherido a la matriz nuclear.

Incubar en tampón de electroforesis alcalina. El ambiente alcalino hace que los superenrollamientos de ADN se desenrollen, exponiendo roturas de ADN de una sola hebra y doble hebra.

Coloque los portaobjetos en una bandeja de gel que contenga tampón de electroforesis. Iniciar electroforesis.

Al estar cargado negativamente, el ADN es atraído hacia el ánodo positivo. Los fragmentos de ADN dañados migran fuera del núcleo y viajan a través de la matriz de